Bảng 3.7. Hiệu suấtthu hồi khi sử dụng ba loại dung môi chiết
Loại dung môi chiết Hiệu suất thu hồi trung bình
Methanol 80,2 %
Acetonitril 55,1 %
Ethanol 78,4 %
Dựa vào độ thu hồi chất phân tích khi sử dụng ba loại dung môi chiết khác nhau, cho thấy chiết bằng methanol đạt được hiệu suất cao nhất, khoảng 80,2 %. Tuy nhiên, để tiếp tục cải thiện khả năng hồ tan AO vào dung mơi chiết nhằm tăng hiệu suất thu hồi, nghiên cứu đã tiến hành thêm nước vào dung môi chiết ở tỉ lệ MeOH:H2O là 90:10.Kết quả phân tích trên ba lần lặp lại đối với mẫu thêm chuẩn ở nồng độ 100 ng/l cho hiệu suất thu hồi tăng lên đáng kể 87,3 %, nghiên cứu lựa chọn sử dụng hỗn hợp dung môi chiết này để chiết AO ra khỏi nền mẫu TĂCN.
3.3.1.2 Lựa chọn cột chiết pha rắn để làm sạch tạp chất
Dựa vào công thức cấu tạo của AO vừa có nhóm kỵ nước- khơng phân cực (phenyl) vừa có nhóm ưa nước-phân cực (amin), chúng tôi lựa cột chiết pha rắn C18 và cột HLB để loại tạp chất. Quá trình thực hiện: Cân khoảng 1,00 g mẫu trắng, hút chính xác 100 µl dung dịch chuẩn 1000 µg/kg . Đậy nắp và lắc xoáy nhẹ. Thêm 15 ml dung dịch chiết. Lắc xoáy và lắc trong 30 phút. Lọc lấy dịch. Tiếp tục thực hiện chiết pha rắn trên cột C18 và cột HLB, mỗi loại cột thực hiện lặp lại 3 lần. Lọc dịch rửa giải qua màng lọc 0,22 µm. Phân tích trên hệ thống sắc ký.
Q trình chiết pha rắn thực hiện như sau:
Tốc độ dòng chảy trong chiết pha rắn được khống chế bằng bộ bơm hút chân khơng, sao cho tốc độ dịng đạt khoảng 1 ml/phút.
- Hoạt hoá cột:Thêm lần lượt 3 ml MeOH, 3 ml nước cất qua cột - Nạp chất phân tích lên cột:
Các nghiên cứu cho thấy, khi pha loãng dịch chiết với nước để tránh ảnh hưởng của dung môi hữu cơ đến cột chiết[16]. Để đánh giá sự ảnh hưởng của dung môi hữu cơ đến cột chiết như đã đề cập. Nghiên cứu đã tiến hành nạp 5 ml dịch chiết khơng pha lỗng qua cột chiết và hiệu suất thu hồi chỉ đạt khoảng từ 24-25 % đối với cả hai loại cột C18 và HLB. Kết quả này cho thấy dung môi hữu cơ có ảnh hưởng khơng nhỏ đến cột chiết pha rắn, làm giảm khả năng lưu giữ của chất phân tích trên cột dẫn đến hiệu suất thu hồi giảm.
Chuyển toàn bộ hỗn hợp dung dịch gồm 1,00 ml dịch chiết AO pha loãng với 4 ml nước cho qua cột.
Cơ chế hấp phụ xảy ra như sau: AO sau khi được đưa vào cột sẽ được hấp thu lên bề mặt vật liệu nhồi nhờ các lực liên kết như lực Van dal van, liên kết phân cực với nhóm chức trong chất nhồi cột.
- Rửa tạp chất: Thêm 2 ml dung dịch MeOH: H2O tỉ lệ 20:80. Hút khô cột sau khi hết dịch chảy qua cột.
- Rửa giải: Thêm chính xác 5,00 ml MeOH qua cột. Hút khô cột sau khi hết dịch chảy qua cột.
Hiệu suất thu hồi mẫu trắng thêm chuẩn 100 µg/kg sau khi chiết pha rắn bằng cột C18 và HLB được trình bày ở bảng 3.10