Quy trình thí nghiệm

2.3.3.3 .Phương pháp đánh giá định tính và định lượng 5-ALA bằng HPLC

2.3.8.2. Quy trình thí nghiệm

Bước 1: Rửa mẫu

- Mẫu được lấy từ dung di ̣ch Bouin được rửa nước qua đêm. Bước 2: Chuyển đệm

- Mẫu được ngâm lần lượt các dung dịch cồn 70, 80, 90, 96 trong 45 phút mỗi dung dịch. Sau đo tiếp tục ngâm trong cồn 100, xylen-cồn, xylen 1, xylen 2 trong 1 giờ mỗi dung dịch.

Bước 3: Tẩm paraffin

- Mẫu tiếp tục được ngâm trong xylen-parafin ở 37C qua đêm.

- Mẫu được chuyển sang ngâm trong parafin 1 trong 5 giờ, parafin 2trong 6 giờ ở 60C.

Bước 4: Đúc mẫu

- Các mẫu khác nhau được chia vào các giếng trong đĩa elisa 24 giếng chú ý đặt mẫu thẳng và chính giữa giếng. Để qua đêm để mẫu khô và đông.

Bước 5: Cắt mẫu và gắn lên lam kính

- Cắt lát dày 7-15µm bằng máy cắt mơ học. - Thả lát cắt mẫu vào 1 bát nước ấm: 60-70C. - Lên lam.

 Bơi albumin lên lam kính (gắn mẫu dễ dàng hơn , giữ mẫu trong các bước rửa tiếp theo). Không bôi quá nhiều vì khi nhuô ̣m mẫu sẽ bắt màu đâ ̣m.

 Hơ lam kính trên ngo ̣n lửa đèn cờn cho khô albumin, vớt lát cắt lên lam kính vào vi ̣ trí có albumin.

- Bảo quản trong tủ ấm 37C trong 1 ngày. Bước 6: Loại parafin

- Ngâm lam kính trong xylen 2, rồi xylen 1, mỗi lần 45 phút.

- Chuyển mẫu vào nước 1-2 phút, sau đó vớt ra, để ráo nước rồi nhuộm. Bước 7: Nhuộm

- Nhuộm Hematoxylin trước trong 15-20 phút.

- Rửa lại bằng nước, để ráo rồi nhuộm Eosin, 5-15 phút. Bước 8: Loại nước, làm trong tiêu bản

- Chuyển nhanh tiêu bản qua dung dịch cồn nồng độ tăng dần: 70°, 90°, 96°, 100° lần 1 và 100° lần 2, mỗi lần 1-2 phút.

- Chuyển tiêu bản qua cồn-xylen, xylen 1, xylen 2, mỗi lần 1-2 phút (riêng xylen 2 ngâm cho tới khi gắn laenzyme)

Bước 9: Gắn laenzyme

- Để bay hơi bớt xylen, lau bỏ phần thuốc nhuô ̣m thừa và mẫu hỏng - Gắn laenzyme bằng nhựa thông bôm Canada

- Bảo quả trong tủ ấm 37°C cho khơ Bước 10:Soi kính và chụp ảnh