Từ sắc đồ trên chúng, dựa vào đƣờng chuẩn chúng tôi xác định đƣợc hàm lƣợng β-sitosterol trong dịch chiết cây lô hội và tính tốn đƣợc hàm lƣợng β- sitosterol trong cây lô hội. Kết quả đƣợc thể hiện ở bảng 3.9.
Bảng 3. 9. Kết quả phân tích mẫu lơ hội thực tế
Lần đo Diện tích pic (mAu) Nồng độ β-sitosterol (ppm)
Lần 1 1395,69 11,59 ± 0,10
Lần 2 1379,38 11,46 ± 0,10
Lần 3 1402,42 11,65 ± 0,10
Trung bình 1392,50 11,57 ± 0,10
Từ kết quả thu đƣợc ở bảng 3.9, chúng tơi tính tốn đƣợc hàm lƣợng β- sitosterol trong dịch chiết từ cây lô hội (chiết với n-hexan) và trong mẫu cây lô hội.
Bảng 3. 10. Hàm lƣợng β-sitosterol trong cây lô hội và dịch chiết từ cây lô hội
Lần đo Hàm lƣợng beta-sitosterol trong dịch chiết lô hội (mg/g)
Hàm lƣợng beta-sitosterol trong cây lô hội (mg/g)
Lần 1 23,183 11,877
Lần 2 22,913 11,829
Lần 3 23,294 12,038
Trung bình 23,130 11,954
%kl/kl 2,313 1,195
Nhƣ vậy, trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, với mục đích ứng dụng phƣơng pháp HPLC để xác định hàm lƣợng β-sitosteroltrong cây lô hội và
dịch chiết từ cây lô hội, chúng tôi đã xác định đƣợc hàm lƣợng β-sitosterol. Từ giá trị hàm lƣợng β-sitosterolnhận thấy, hàm lƣợng β-sitosterol trong cây lô hội và dịch chiết từ cây lô hội tƣơng đối cao khoảng 2,313% với dịch chiết và 1,195% với cây lô hội.
KẾT LUẬN
Trên cơ sở các kết quả thực nghiệm đã nghiên cứu xác định hàm lƣợng β- sitosteroltrong cây lô hội và dịch chiết từ cây lô hội bằng phƣơng pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao, chúng tôi đã thu đƣợc các kết quả sau:
1. Nghiên cứu và tối ƣu đƣợc các điều kiện chạy sắc ký lỏng hiệu năng cao để xác định β-sitosterolbao gồm: cột sắc kí là Acclain C 30 (5 μm; 4,6 x 250
mm); pha động ACN/AcOH 0,1%; tốc độ dòng 0,8 ml/phút; detector PDA (
max = 210nm).
2. Tối ƣu điều kiện để tách chiết β-sitosterolra khỏi nền mẫu: dung môi chiết là MeOH sau đó chiết tiếp với dung mơi n-hexan để tách β-sitosterol.
3. Xây dựng khoảng tuyến tính từ 5 đến 100 ppm và đƣờng chuẩn xác định β-
sitosteroly = (120,71±4,106)x – (3,5161±205,384); có hệ số tƣơng quan
tuyến tính R2> 0,999. Phƣơng pháp có giá trị LOD = 0,037 và LOQ = 0,124 , hiệu suất thu hồi 97,7%, giá trị RSD 1,47% đạt yêu cầu của AOAO.
4. Ứng dụng phƣơng pháp để phân tích mẫu lơ hội và đã xác định hàm lƣợng β-
sitosterolkhá cao trong dịch chiết và cây lô hội 2,313% trong dịch chiết lô
hội và 1,195% trong cây lô hội.
Từ các kết quả thu đƣợc, chúng tơi nhận thấy phƣơng pháp phân tích có độ nhạy cao, phân tích nhanh và chính xác, có thể áp dụng phân tích hàm lƣợng β- sitosterolvới độ tin cậy cao. Chúng tôi sẽ tiếp tục mở rộng phƣơng pháp để phân
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Võ Văn Chi (1991), Cây thuốc An Giang, NXB Uỷ Ban Khoa Học Kỹ Thuật An Giang
2. Ðỗ Thanh Hội (1997), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa Học Kỹ Thuật.
3. Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất bản Trẻ, Hà Nội. 4. Phạm Hoàng Hộ (2001), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất bản Trẻ, Hà Nội.
5. Nguyễn Đình Triệu (1999), Các phương pháp vật lý ứng dụng trong hoá học,
Nhà xuất bản Đại học Quốc gia Hà Nội.
Tiếng Anh
6. Abidi S.L., (2001), ―Chromatographic analysis of plant sterols in foods and vegetable oils‖, J. Chromatogr A, 935 (1-2), pp. 173-201.
7. Awad AB, Fink CS, (2000), ―Phytosterols as anticancer dietary components: evidence and mechanism of Action‖, J. Nutr, 130, pp. 2127-2130.
8. Akshada N. Kakade* and C.S. Magdum, (2012), ―HPLC analysis of β-sitosterol in herbal medicine and vegetable oils‖, International Journal of pharmacy & Life sciences, Vol.3, pp. 1666-1669.
9. Anilkumar KR, Sudarshankrishna KR, Chandramohan G, Ilayaraja N, Khanum F, Bawa AS., (2010), ―Effect of Aloe vera gel extract on antioxidant enzymes and azoxymethane induced oxidative stress in rats‖, Ind J Exp Biol, 48, pp. 837–842. 10. Boudreau MD, Beland FA., (2006), ―An evaluation of the biological and toxicological properties of Aloe barbadensis (Miller), Aloe vera‖. J Environ Sci Health, 24, pp. 103–154.
11. Bozzi A. *, Perrin C., Austin S., Arce Vera F. ( 2007), ―Quality and authenticity of commercial aloe vera gel powders‖. Food Chemistry,103, pp. 22-30.
12. Bruce, W. G. G., (1967), ―Investigations of antibacterial activity in the Aloe‖,
South African Medical Journal, Vol41, p. 984.
13. Capasso F., Borrelli E., Capasso R., Di Carlo G., Izzo A.A., Pinto L., Mascolo N., Castaldo S., Longo R., (1998), ―Aloe and its therapeutic use‖, Phytother. Res,
14. Chithra P., Sajithlal G.B., Chandrakasan G., (1998), ―Influence of Aloe vera on the healing of dermal wounds in diabetic rats‖, J. Ethnopharm, Vol 59, pp. 195-
201.
15. Davis RH., Donato JJ., Hartman GM., et al, (1994), ―Anti-inflammatory and wound healing activity of a growth substance in Aloe vera‖, J Am Podiatr Med Assoc, 84, pp. 77-81.
16. Gerber, F.; Krummen, M.; Potgeter, H.; Roth, A.; Siffrin, C.; Spoendlin, C., (2004), ―Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice‖, Journal of Chromatography A, 1036 (2), pp. 127–133. 17. Grey V., Rouyer-Fessard C., Gammeltoft S., et al, (1991), ―Insulinlike growth factor II/mannose-6-phosphate receptors are transiently increased in the rat distal intestinal epithelium after resection‖, Mol Cell Endocrinol, 75, pp. 221-227.
18. Grindlay D., ReynoldsT., (1986), ―The Aloe vera phenomenon: A review of the properties and modern uses of the leaf parenchyma gel‖, Journal of Ethnopharmacology, Vol 16, pp. 117—151.
19. Holanda C.M.C.X., Costa M.B., Silva N.C.Z., Silva Junior M.F., Arruda Barbosa V.S., Silva R.P., Medeiros A.C, (2009), ―Effect of an extract of Aloe vera on the biodistribution of sodium pertehnetate (Na99m TcO4) in rats‖, Acta Cir. Bras, Vol 24, p.5.
20. Je-Chiuan Ye1, Wei-Chun Chang2, Dennis Jine-Yuan Hsieh3, and Meen-Woon Hsiao4*, (2010), ―Extraction and analysis of β-sitosterol in Herbal Medicines‖,
Journal of Medicinal Plants Research, Vol. 4(7), pp. 522-527.
21. Jones K., Aloe corp, (2005), ―The antidiabetic activity of Aloe vera‖, Cosmetic
Science Technology, 2, pp. 34-35.
22. Joshi S.P, (1998), ―Chemical constituents and biological activity of Aloe barbadensis‖ J. Med. Aromat.Plant, Vol 20, pp. 768-773.
23. Koo M.W.L., (1994), ―Aloe vera: Antiulcer and antidiabetic effects‖, Phytother
24. Kim K., Kim H., Kwon J., editors. et al., (2009), ―Hypoglycemic and hypolipidemic effects of processed Aloe vera gel in a mouse model of non-insulin- dependent diabetes mellitus‖, Phytomedicine, 16, pp. 856–863.
25. Ma Y.C., Kim H.Y., (1997), ―Determination of steroids by liquid chromatography/mass spectrometry‖, J. Of the Amerrican Society for Mass Spectrometry, Vol.8(9), pp. 1010-1020.
26. Miyuki T., Eriko M., Yousuke I., Noriko H., Kouji N., Muneo Y., Tomohiro T., Hirotoshi H., Mitunori T., Masanori I., Ryuuichi H., (2006), ―Identification of Five Phytosterols from Aloe Vera Gel as Anti-diabetic Compounds‖, Biol. Pharm.Bull,
Vol 29(7), pp. 1418-1422.
27. Misawa E., Tanaka M., Nomaguchi K., et al., (2012), ―Oral ingestion of Aloe vera phytosterols alters hepatic gene expression profiles and ameliorates obesity- associated metabolic disorders in zucker diabetic fatty rats‖, J Agric Food Chem,
60, pp. 2799–2806.
28. Newall C.A., Anderson L.A., Phillipson J.D., (1996), Herbal Medicines. A Guide for Health-Care Professionals, The Pharmaceutical Press, London.
29. Raksha Bawankar, Deepti V.C., Pooja Singh, Rathinasamy Subashkumar, Govindasamy Vivekanandhan1 and Subramanian Babu, (2012),‖ Evaluation of Bioactive Potential of an Aloe vera Sterol Extract‖, Phytother. Res, 27, pp. 864-
868.
30. Rajnish G., Anil K. S., M.P. Dobhal., M.C. Sharma, R.S. Gupta., (2011), ―Antidiabetic and antioxidant potential of b-sitosterol in streptozotocin-induced experimental hyperglycemia‖, Journal of Diabetes, Vol 3, pp. 29–37.
31. Rajasekaran S., Ravi K., Sivagnanam K., Subramanian S., (2006), ―Beneficial effects of Aloe vera leaf gel extract on lipid profile status in rats with streptozotocin diabetes‖, Clin Exp Pharmacol Physiol, 33(3), pp. 232–237.
32. Reynolds T., Dweck AC., (1999), ―Aloe vera leaf gel: a revise update‖, J Ethnopharmacol, 68, pp. 3–37.
33. Seongwon Choi and Myung-Hee Chung, (2003), ―A review on the relationship between Aloe vera components and their biological effects‖, Seminars in Integrative Medicine, 1, pp. 53-62.
34. Shimada K., Higashi T., Mitamuara K., (2003), ―Developmemt of analyses of biological steroids using chromatography‖, Chromatography, Vol 24(1).
35. Tanaka M1., Misawa E., Ito Y., Habara N., Nomaguchi K., Yamada M., Toida T., Hayasawa H., Takase M., Inagaki M., Higuchi R., (2006), ―Identification of five phytosterols from Aloe vera gel as anti-diabetic compounds‖, Biol Pharm Bull,
29(7), pp. 1418-1422.
36. Urch, David, (1999), ―Aloe vera Nature’s Gift, Great Britain”, Blackdow Publications, p. 15.
37. Vogler B.K., Ernst E., (1999), ―Aloe vera: A systematic review of its clinical effectiveness‖, Br.J.Gen. Pract, Vol 49, pp. 823-828.
38. Yagi T., Yamauchi K., (1999), ―Synergistic effects of anthraquinones on the purgative activity of rhein anthrone in mice‖, J Pharm Pharmacol, 51, pp. 93-95. 39. Zak A., Vecka M., Tvrzicka E., Hruby M., Novak F., Papezova H., Lubanda H., Vesela L., Stankova B., (2005), ―Composition of Plasma Fatty Acids and Non- Cholesterol Sterols in Anorexia Nervosa‖, Physiol. Res, vol 54, pp. 443-51.
40. Sorenson WR1., Sullivan D., (2006), ―Determination of Campesterol, Stigmasterol, and beta-Sitosterol in Saw Palmetto Raw Materials and Dietary Supplements by Gas Chromatography: Single-Laboratory Validatio‖, J AOAC Int,
89(1), pp. 22-34.
41. Susmlta Chawla and Yogendra Kumar Bansal, (2014), ―Qualitative and quantitative estimation of β-sitosterol from in vitro regenerated stem bark and callus of Helicteres isora L‖, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, Vol 7 Issue 3, pp. 178-180.
42. Nair VD1., Kanfer I., Hoongmartens J., (2006), ―Determination of stigmasterol, beta-sitosterol and stigmastanol in oral dosage forms using high performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection‖, J Pharm Biomed Anal, 41(3), pp. 731-737.
43. Yan-Zong Chena, Shih-Yao Kaoa, Hao-Cheng Jiana, Yu-ManYua, Ju-Ying Lia, Wei-Hsien Wangb, Chung-Wei Tsaia, (2015), ―Determination of cholesterol and four phytosterols in foods without derivatization by gas chromatography-tandem mass spectrometry‖, Journal of Food and Drug Analysis,23(4), pp.636-644.
44. Jianlin Tan , Xuemei Niu , Guangyu Yang , Lang Wang , Yuanxing Duan , Yi Han , (2013), ― Quantitative dêtrmination of free phytosterol in Tobacco leaves by UPLC-MS/MS‖, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies,
36(5), pp. 591-599.
45. Kardani F., Daneshfar A., Sahrai R., (2011), ―Determination of β-sitosterol and cholesterol in oils after reverse micelles with Triton X-100 coupled with ultrasound-assisted back-extraction by a water/chloroform binary system prior to gas chromatography with flame ionization detection‖, Analytica Chimica Acta,
701(2), pp. 232-237.
46. Rogelio Paniagua-Pérez,1,* Gabriela Flores-Mondragón,1 Celia Reyes- Legorreta,1 Brígida Herrera-López,1 Isabel Cervantes-Hernández,1 Osiris Madrigal- Santillán,2 José Antonio Morales-González,2 Isela Álvarez-González,3 and Eduardo Madrigal-Bujaidar3,*, (2017), ― Evaluation of the anti-inflammatory capacity of beta-sitosterol in rodent assays‖, FR J tradit Complement altern Med, 14(1), pp. 123-130. T i ế n g A n h