CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu và thực nghiệm
2.3.2.1. Điều kiện phân tích TCS và TCC trên thiết bị LC-MS/MS
Điều kiện bộ phận khối phổ MS
Các điều kiện và thông số của thiết bị LC-MS/MS để định lƣợng TCS và TCC đƣợc chúng tôi tham khảo trong 2 tài liệu chính do hãng thiết bị Agilent Technologies cung cấp [4] và trong 1 nghiên cứu đã đƣợc công bố [34]. Các thông số cơ bản của phƣơng pháp đƣợc khảo sát trên thiết bị sắc ký lỏng 2 lần khối phổ Agilent Technologies Triple Quad 6460 LC-MS/MS tại phịng thí nghiệm Trung tâm Phân tích và giám định thực phẩm Quốc gia – Viện Công nghiệp thực phẩm.
Hình 2.1. Thiết bị LC-MS/MS và một số thiết bị chính được sử dụng
Thiết bị LC-MS/MS Triple Quad 6460 gồm 2 phần chính: phần sắc ký lỏng cao áp LC 1290 Inifinity và phần khối phổ 2 lần Triple Quad 6460 LC-MS.
Bộ phận khối phổ Triple Quad 6460 LC-MS với các thông số cơ bản sau: Chế độ ion hóa: ion hóa phun điện tử ESI và ion hóa hóa học ở áp suất khí quyển APCI.
Các chƣơng trình khảo sát sự phân mảnh chính: SCAN (qt tất cả mảnh phổ đƣợc ion hóa), SIM (chọn lọc ion mẹ đƣợc ion hóa), MRM (chọn lọc ion con định lƣợng và định tính).
Qua tham khảo một số báo cáo khoa học, việc lựa chọn phổ khối ion mẹ và ion con của hợp chất triclosan và triclocarban thƣờng sử dụng kỹ thuật ion hóa phun điện tử, với chế độ ion âm (ESI-). Nhóm nghiên cứu tiến hành tiêm trực tiếp (khơng qua cột tách sắc ký) chất chuẩn và chất nội chuẩn nồng độ 10 ppm, chế độ scan ion để khảo sát lựa chọn ion mẹ. Sử dụng phần mềm Agilent MassHunter Optimizer để khảo sát tự động, lựa chọn ion con, điện áp Fragmentor và năng lƣợng bắn phá CE tối ƣu.
Sau khi lựa chọn ion mẹ, ion con và các thông số Fragmentor, CE, nhóm nghiên cứu tiến hành khảo sát trên bộ phận sắc ký lỏng cao áp.
Bộ phận sắc ký lỏng cao áp LC 1290 Inifinity với thông số sau: áp suất tối đa 1000 Pa, với 4 kênh dung mơi, có thể sử dụng chế độ gradient và hệ thống bơm mẫu tự động thể tích tối đa 20 µL.
Điều kiện HPLC – cột tách và dung môi
Cột tách góp phần quan trọng trong việc quyết định quá trình tách chất cần xác định, đặc biệt trong nghiên cứu xác định đồng thời nhiều chất thuộc các nhóm chất khác nhau. Lựa chọn cột phân tích phù hợp dựa trên một số tiêu chí sau:
Có thể tách tốt các chất cần xác định; Cột phổ biến, dễ mua, chi phí thấp; Tuổi thọ cột bền;
Pha động sử dụng phổ biến, đơn giản.
Trong nghiên cứu này, cột tách đƣợc khảo sát là cột C18 và cột C8 là các loại cột tách phổ biến trong các phịng thí nghiệm.
Thơng số cột tách nhƣ sau:
o Agilent Zorbax SB – C8 (3,5 µm, 2,1 x 100 mm)
o Agilent Poroshell 120 SB – C18 (2,7 µm, 2,1 x 100 mm)
Dung mơi thƣờng đƣợc sử dụng cho phân tích sắc ký lỏng 2 lần khối phổ là methanol, acetonitril, dung dịch acid formic 0,1% hoặc acid acetic 0,1% trong nƣớc, dung dịch đệm amoni acetate 5-10 mM. Trong nghiên cứu này chúng tơi khảo sát hiệu quả tách và ion hóa của dung mơi, chế độ gradient nhằm tách các chất phân tích, tăng hiệu quả ion hóa và độ nhạy của phƣơng pháp.