Giếng 1, 2: 60°C; giếng 3, 4: 62°C, giếng 5, 6: 63°C, giếng 7, 8: 64°C. Giếng 1, 3, 5, 7: mẫu dương tính; giếng 2, 4, 6, 8: mẫu âm tính đối chứng. Hình bên trái: bộ mồi thứ nhất; Hình bên phải: bộ mồi thứ 2.
Kết quả điện di cho thấy, nhiệt độ 63°C là điều kiện nhiệt độ phù hợp nhất cho phản ứng với các cặp mồi đặc hiệu cho phytoplasma được thiết kế trong nghiên cứu này. Kết quả phản ứng tương tự nhau ở cả hai cặp mồi, cho thấy hiệu quả khuếch đại của hai bộ mồi này khá tương đồng với nhau trong cùng điều kiện xảy ra phản ứng.
Một đặc trưng của LAMP là khuếch đại ADN hiệu quả trong điều kiện đẳng nhiệt, trong đó, nhiệt độ phù hợp cho phản ứng có thể dao động từ 60-65°C [79]. Trong nghiên cứu này, nhiệt độ phù hợp nhất cho LAMP là 63°C, và giống nhau ở các cặp mồi xác định phytoplasma cũng như cặp mồi nội chuẩn. Kết quả này khá tương đồng với một số nghiên cứu đã được công bố trước đây [38]. Nhiệt độ 63°C được đánh giá là tạo điều kiện ủ mồi và tăng cường khả năng chịu đựng các chất ức chế thường được tìm thấy trong các mẫu chẩn đoán bệnh; một lợi thế polymerase khác. Đây cũng là nhiệt độ phù hợp nhất cho hoạt tính xúc tác của enzyme trong vi khuẩn so với Bacillus tự nhiên [4]. Từ kết quả nghiên cứu này, nhiệt độ 63°C được lựa chọn để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.
3.4. Kiểm tra kết quả của phản ứng
3.4.1. Thử nghiệm chất chỉ thị màu
HNB và calcein là những chất chỉ thị màu phổ biến cho phản ứng LAMP, đã được nhiều nghiên cứu trước đây ứng dụng và có hiệu quả tốt. Trong nghiên cứu này, hai chất
chỉ thị màu được thử nghiệm bổ sung vào hỗn hợp để kiểm tra mức độ chỉ thị cho phản ứng LAMP ở điều kiện nhiệt độ 63°C, thu được kết quả như sau: