(-): mẫu đối chứng; 0: nồng độ ADN ban đầu; 1-8: nồng độ ADN khn được pha lỗng tương
ứng từ 101-108 lần; M: ADN thang chuẩn. A: đánh giá hiệu quả của phản ứng theo sự thay đổi
màu sắc của HNB. B: Kết quả điện di sản phẩm LAMP trên gel agarose.
Hình 20 cho thấy khả năng phát hiện và hiệu quả khuếch đại của bộ mồi thứ 2, thể hiện ở cả sự thay đổi màu sắc của HNB và trong kết quả điện di. Đánh giá sự thay đổi màu sắc của HNB cho thấy, ở các phản ứng có bổ sung ADN khn, màu sắc của HNB đều thay đổi một cách rõ ràng so với đối chứng. Sự sai khác màu sắc đó được nhận thấy đến tận khi nồng độ ADN khn được pha lỗng đến 107 lần. Tuy nhiên, sau khi pha lỗng ADN khn thêm 10 lần nữa (pha loãng 108 lần so với ban đầu) thì màu sắc của ADN lại trở nên đậm hơn và trở nên gần giống với mẫu đối chứng, chứng tỏ rằng, hiệu quả chỉ thị của HNB dừng lại ở nồng độ ADN khuôn khoảng 10-8 lần so với nồng độ ban đầu, tương đương với khoảng 100 x 10-8 ng ADN. Nói cách khác, thơng qua màu sắc của HNB, có thể xác định được sự có mặt của ADN mục tiêu với hàm lượng khoảng 100x10- 8 ng. Sản phẩm khuếch đại cũng được kiểm tra lại bằng điện di trên gel agarose 2% và
nhuộm ethidium. Kết quả này được so sánh với kỹ thuật PCR với cặp mồi F3/B3 cho thấy, LAMP có độ nhạy hơn PCR khoảng 10 lần (hình 21)
Hình 21. Điện di kiểm tra độ nhạy của phản ứng PCR với cặp mồi F3/B3 của bộ mồi thứ 2
(-): mẫu đối chứng; 0: nồng độ ADN ban đầu; 1-8: nồng độ ADN khn được pha lỗng tương
ứng từ 101-108 lần; M: ADN thang chuẩn. Hình trên: đánh giá hiệu quả của phản ứng theo sự
thay đổi màu sắc của HNB. Hình dưới: Kết quả điện di sản phẩm LAMP trên gel agarose
3.6. Đánh giá khả năng phản ứng chéo với ADN sắn
Để kiểm tra khả năng phản ứng chéo giữa bộ mồi nhận biết phytoplasma với ADN của sắn, nhằm tránh những nhầm lẫn trong xác định ADN của phytoplasma trong cây sắn nhiễm bệnh, một phản ứng LAMP được thiết kế, sử dụng mồi đặc hiệu cho plasmid và ADN khuôn bao gồm ADN plasmid, ADN plasmid trộn ADN sắn, ADN sắn, điện di trên gel agarose 2% và nhuộm ethidium sau đó quan sát sản phẩm trên đèn cực tím, thu được kết quả như sau:
(A) (B)