A. Đánh giá kết quả theo chất chỉ thị màu. B. Hình ảnh điện di.
Mẫu 1, 2: phản ứng bổ sung chất chỉ thị Calcein; mẫu 3, 4: phản ứng bổ sung chất chỉ thị HNB; mẫu 5, 6: phản ứng không dùng chất chỉ thị màu. Mẫu 1, 3, 5: mẫu âm tính đối chứng. Mẫu 2,
4, 6: mẫu dương tính.
Quan sát sản phẩm sau phản ứng cho thấy, khi bổ sung thêm Calcein trong phản ứng, màu sắc của dung dịch thay đổi không đáng kể. Theo kỳ vọng, khi phản ứng xảy ra, Calcein sẽ chuyển màu từ vàng nhạt sang xanh lục, trong khi mẫu âm tính sẽ khơng hiển thị màu này. Tuy nhiên, trong cả hai trường hợp, màu của hỗn hợp phản ứng đều khơng có sự thay đổi rõ rệt. Kiểm chứng bằng điện di trên gel agarose cho thấy vẫn xuất hiện sản phẩm của phản ứng LAMP với tập hợp các băng ADN có kích thước khác nhau trên gel điện di. Điều này chứng tỏ, phản ứng khuếch đại gen vẫn xảy ra nhưng dường như
điều kiện phản ứng vẫn chưa phù hợp với Calcein. Trong khi đó, với chất chỉ thị màu là hydroxynapthol blue (HNB), phản ứng dương tính đã chuyển màu từ xanh đậm sang xanh nhạt, trong khi hình ảnh điện di cho thấy các băng điện di tương tự như phản ứng có bổ sung Calcein hoặc mẫu khơng bổ sung chất chỉ thị màu. Kết quả này chứng tỏ rằng, HNB có hiệu quả chỉ thị cho phản ứng LAMP hơn Calcein trong nghiên cứu này. Do đó, HNB sẽ được lựa chọn như một chất chỉ thị cho phản ứng LAMP ở các thí nghiệm tiếp theo.
Sau khi tìm kiếm được chất chỉ thị màu phù hợp cho phản ứng LAMP trong nghiên cứu này là HNB, một thí nghiệm khác được thực hiện để xác định nồng độ HNB phù hợp, bổ sung vào phản ứng LAMP để đạt được hiệu quả chỉ thị cao nhất. Ba nồng độ HNB được kiểm tra trong thí nghiệm này bao gồm 120 mM, 100 mM và 80 mM, đánh giá hiệu quả thông qua sự thay đổi màu sắc và điện di trên gel agarose 2%, nhuộm ethidium bromide sau đó soi dưới ánh sáng cực tím có bước sóng 254 nm, thu được kết quả như