rong Nâu tại tỉnh Khánh Hòa
Tiến hành tách chiết fucoidan ra khỏi năm loài rong Nâu tại tỉnh Khánh Hòa theo quy trình tách chiết đạt hiệu suất cao nhất, đã được khảo sát tại mục 2.3.3.1, để thu fucoidan tinh khiết. Sau đó, sấy fucoidan đến khối lượng không đổi. Hàm lượng fucoidan được tính bằng khối lượng fucoidan tinh chế chia trên khối lượng mẫu lấy ban đầu.
Tiến hành bố trí thí nghiệm trên năm loài rong: S. mcclurei, S. microcystum,
Hình 2.6. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng Fucoidan
trong năm loài rong Nâu tại tỉnh Khánh Hòa
Bột rong
Trung hòa Nấu
Lọc nhựa trao đổi ion dương Lọc giấy lọc
Lọc cột cát và than hoạt tính 2 lần
Tủa fucoidan
Li tâm hay lọc vải thô Tủa Alginate
Dịch
Lọc thu tủa
Sấy (500C, 18h) Cân Tính % khối lượng fucoidan Bã Rong: 10g Nước: 231ml CaCl2: 1g EtOH 90%/dịch rong = 2/1 S. microcystum
Thuyết minh quy trình
Nấu
Cân 10g (M) bột rong cho vào cốc thủy tinh, thêm 231ml nước máy. Đem cốc thủy tinh nấu trên bếp điện, giữ sôi trong 45 phút. Dưới tác dụng của nhiệt độ, các chất trong rong cũng được tách ra khỏi tế bào rong biển
Tủa Alginate
Chuẩn bị dung dịch CaCl2: cân 1g CaCl2, hòa tan trong 50ml nước máy rồi lọc qua giấy lọc để thu được dung dịch trong.
Sau khi bột rong được nấu xong, cho dung dịch CaCl2 đã chuẩn bị vào, dùng đũa thủy tinh khuấy trộn đều. Hỗn hợp sau khi tủa alginate đem lọc qua vải lọc thô để tách bã, thu dịch rong. Phần bã rong thêm nước và tiến hành tách chiết thêm lần nữa ở điều kiện tương tự. Dịch rong của hai lần tách chiết được trộn chung.
Lọc
Dịch rong thu được đem lọc qua cột cát và than hoạt tính hai lần để loại bỏ tủa alginate mịn và các chất rắn lơ lửng.
Dịch sau lọc cát và than hoạt tính được đem lọc qua giấy lọc để thu dịch trong.
Dịch rong thu được sau khi lọc qua giấy lọc còn chứa các ion dương do muối CaCl2 dư. Muối có mặt trong dung dịch sẽ rửa giải tủa fucoidan, hay nói cách khác một lượng fucoidan sẽ không kết tủa ứng với một nồng độ muối xác định trong dung dịch. Chính vì vậy, ta cần loại bỏ các ion dương ra khỏi dịch rong bằng cách lọc dịch rong qua cột nhựa trao đổi ion dương.
Tủa Fucoidan
Tôi tiến hành trung hòa dịch rong trước khi tiến hành tủa fucoidan.
Tủa fucoidan bằng EtOH 90% (v/v) với tỉ lệ dịch rong/ EtOH bằng 1/2. Sau đó để lắng tủa trong 24h. Gạn bỏ phần cồn bên trên, thu tủa fucoidan.
Sấy
Sấy 5 tờ giấy lọc đến khối lượng không đổi rồi cân 5 tờ giấy lọc bằng cân tiểu li. Tính giá trị trung bình của một tờ giấy lọc (M1). Cho tủa fucoidan qua giấy lọc để loại bỏ dịch lỏng, thu tủa fucoidan. Cho cả giấy lọc và fucoidan vào tủ sấy, sấy ở nhiệt độ 500C trong 18h đến khối lượng không đổi. Cân giấy lọc và fucoidan sau khi sấy (M2).
Tính % khối lượng fucoidan có trong mẫu thí nghiệm: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
100 % 2 1 M M M Fucoidan