Nguyên tắc của phương pháp tách chiết fucoidan theo bản quyền này là sử dụng nước nóng để chiết rút fucoidan trong rong biển. Caxi chlorua được sử dụng để tách alginate và được bổ sung ngay trước công đoạn thổi hơi nóng; loại bỏ các chất có phân tử lượng nhỏ như muối CaCl2 dư bằng cách cho dịch rong chạy qua thiết bị lọc rây phân tử. Tủa fucoidan bằng EtOH ở nồng độ thích hợp.
Hình 2.1. Quy trình chiết tách fucoidan theo bản quyền US6573250B2
Do điều kiện máy móc thiết bị của Viện Nghiên cứu và Ứng dụng Công nghệ Nha Trang còn hạn chế nên bản quyền US6573250B2 được biến đổi cho phù hợp với điều kiện vật chất theo quy trình được thuyết minh ở phần dưới. Từ đây tôi gọi quy trình biến đổi theo bản quyền US6573250B2 là quy trình 1.
Lọc rây phân tử với màng 30kDa, chạy đến khi còn 50 ml thêm nước thành 200 ml, chạy đến còn 60 ml, lặp lại 3
lần.
1kg sản phẩm khô
(65% fucoidan và 33% U-fucoidan) Chiết rắn lỏng trên thiết bị chiết Westfalier Thổi hơi nóng (21 – 900C) vào trong 40 phút
Giữ 90 – 950C trong 1 giờ Làm nguội
Rong khô: 50g CaCl2: 13.75g Nước máy: 2250 ml
Thuyết minh quy trình
Bột rong
Cân 50g rong khô đã xay thành bột cho vào cốc thủy tinh. Dùng ống đong đong đúng 2250 ml nước máy cho vào hòa trộn với bột rong. Cân 13.75g CaCl2, hoà trộn với nước.
Thổi hơi nóng
Thổi hơi nóng vào mẫu với nhiệt độ là 21 - 900C trong vòng 40 phút. Sau 40 phút tiến hành giữ mẫu ở nhiệt độ 900C trong thời gian là 1 giờ, sau đó làm nguội mẫu. Sau khi mẫu đã nguội thì tiến hành lọc vải thô để loại bỏ kết tủa alginate và bã rong.
Lọc qua cột cát và than hoạt tính
Lúc này trong dịch rong vẫn còn tồn tại các tạp chất có khối lượng phân tử lớn và quan trọng hơn là chúng không phải là fucoidan cần thu nên cần phải loại bỏ chúng ra khỏi dịch rong bằng cách lọc dịch qua cột cát và than hoạt tính.
Lọc rây phân tử
Dịch rong sau khi lọc qua cột cát và than hoạt tính cần cho chạy qua thiết bị lọc rây phân tử MWCO 30kDa để tách muối đến khi còn 50 ml dịch rong, thêm vào 200ml nước cất, cho chạy đến khi còn 60 ml, lặp lại 3 lần.
Tủa fucoidan
Sau đó cho EtOH vào dịch rong ở nồng độ 70% để tủa fucoidan.
Gạn tủa và sấy
Để 1 thời gian cho kết tủa lắng xuống hết, gạn bỏ lớp cồn phía trên. Sau khi tủa cồn xong thì tiến hành thu fucoidan bằng cách cho tủa qua thiết bị lọc hút chân không để loại cồn. Tuy nhiên khi hút chân không xong thì fucoidan vẫn còn rất ẩm, vì vậy cần tiến hành cho fucoidan vào sấy ở 500C trong 18 giờ đến khối lượng không đổi.