Nguyên tắc của phương pháp này là chiết tách fucoidan ở nhiệt độ cao với các dung môi chiết khác nhau là nước và axit HCl. Caxi chlorua được sử dụng để tách alginate; loại bỏ các chất có phân tử lượng nhỏ như muối CaCl2 dư bằng cách cho dịch rong chạy qua thiết bị lọc rây phân tử. Tủa fucoidan bằng EtOH ở nồng độ thích hợp.
Hình 2.2. Quy trình chiết fucoidan theo bản quyền EP0645143A1
Đun nóng ở 1000C từ 10 đến 60 phút
Ly tâm loại bỏ bã rong
+ CaCl2 đạt 0.5 đến 1g/l. Ly tâm loại bỏ acid aginic.
Chạy qua siêu lọc 3 lần, mỗi lần với 10 lần thể tích nước cất.
Đông khô hoặc tạo kết tủa với 2 lần thể tích EtOH
Sấy chân không
Fucoidan Đun nóng 25-1000C 10 đến 60 phút. pH = 2 Ly tâm loại bỏ bã rong + CaCl2 đạt 0.5 đến 1g/l. Ly tâm loại bỏ acid aginic
Chạy qua siêu lọc 3 lần, mỗi lần với 10 lần thể tích nước cất.
Đông khô hoặc tạo kết tủa với 2 lần thể tích EtOH
Sấy chân không
Fucoidan Huyền phù
nước:rong = 3
Huyền phù dd HCl:rong = 3
Do điều kiện máy móc thiết bị của Viện Nghiên cứu và Ứng dụng Công nghệ Nha Trang còn hạn chế nên bản quyền EP0645143A1 được biến đổi cho phù hợp với điều kiện vật chất theo hai quy trình được thuyết minh ở phần dưới. Từ đây tôi gọi hai quy trình biến đổi theo bản quyền EP0645143A1 sử dung nước và axit HCl làm dung môi chiết lần lượt là quy trình 2 và quy trình 3.
Thuyết minh quy trình
Quy trình 2
Chuẩn bị mẫu
Cân 50g rong khô đã xay thành bột hòa trộn với 1154 ml nước máy rồi cho vào bình thủy tinh.
Đun nóng
Đun nóng mẫu trong bình thủy tinh bằng bếp điện ở 1000C trong vòng 45 phút. Khi đạt được nhiệt độ là 1000C trong thời gian 45 phút thì ngưng lại không đun nữa, sau đó để nguội và ly tâm loại bỏ bã rong.
Loại axit alginic
Dịch rong thu được sẽ loại bỏ acid alginic bằng cách cho CaCl2 vào dịch. Kết tủa thu được là alginate sẽ được tách ra khỏi dịch rong bằng ly tâm hoặc lọc vải, tiếp tục cho dịch rong chạy qua cột cát và than hoạt tính.
Lọc rây phân tử
Dịch rong sau khi lọc qua cột cát và than hoạt tính cần cho chạy qua thiết bị lọc rây phân tử MWCO 30kDa để tách muối đến khi còn 20 ml dịch rong, thêm vào 200ml nước cất, cho chạy đến khi còn 30 ml, lặp lại 3 lần.
Tủa fucoidan
Tiến hành kết tủa dịch rong bằng EtOH 900 với thể tích gấp hai lần thể tích dịch rong. Để lắng 24h, sau đó sẽ gạn hết cồn lớp trên.
Sấy
lượng không đổi.
Quy trình 3
Chuẩn bị mẫu
Lấy 50g bột rong khô cho vào bình tam giác. Chuẩn bị dung dịch HCl có PH = 2 với thể tích cần cho thí nghiệm này là 1154 ml.
Đun nóng
Đun mẫu ở nhiệt độ từ 25 – 1000C trong vòng 10 đến 60 phút. Lọc vải loại bỏ bã rong.
Loại axit alginic
Dịch thu được cũng được kết tủa loại alginate bằng cách cho CaCl2 vào dịch với khối lượng CaCl2 là 5g. Lọc vải để loại bỏ alginate và tiến hành lọc dịch thu được qua cột cát và than hoạt tính. Khi dịch rong đã được lọc 2 lần qua cột cát và than hoạt tính.
Lọc rây phân tử
Dịch rong sau khi lọc qua cột cát và than hoạt tính cần cho chạy qua thiết bị lọc rây phân tử MWCO 30kDa để tách muối đến khi còn 20 ml dịch rong, thêm vào 200ml nước cất, cho chạy đến khi còn 30 ml, lặp lại 3 lần.
Tủa fucoidan và sấy
Tiến hành kết tủa fucoidan bằng EtOH 900 với thể tích gấp hai lần thể tích dịch rong. Để lắng kết tủa và gạn lấy kết tủa đem đi hút chân không và sấy đến khối lượng không đổi.