Duy Nhứt và cộng sự
Để khảo sát các phương pháp định lượng fucoidan tôi sử dụng phương pháp chiết tách fucoidan đã được Nguyễn Duy Nhứt và cộng sự sử dụng năm 2007 [5].
loãng ở nhiệt độ phòng. Tủa alginate và fucoidan bằng nhựa benzalkonium chloride, rồi dùng muối CaCl2 và NaCl để rửa giải tủa. Thu fucoidan theo cách kết tủa bằng EtOH ở nồng độ thích hợp và sấy fucoidan đến khối lượng không đổi. Tôi gọi quy trình tách chiết fucoidan của Nguyễn Duy Nhứt và cộng sự là quy trình 4.
Hình 2.3. Quy trình chiết tách fucoidan của Nguyễn Duy Nhứt và cộng sự Thuyết minh quy trình
Chuẩn bị mẫu
50g bột rong được đem trộn đều với 500 ml dung dịch axit HCl 0.1N.
Ngâm
Mẫu được ngâm 24 giờ ở nhiệt độ phòng, thỉnh thoảng có khuấy trộn.
Li tâm và lọc rây phân tử
Tủa nhựa benzalkonium chloride
Sấy Ngâm 24h
Li tâm tách bã
Lọc qua thiết bị lọc rây phân tử 1kDa đến còn 50ml
Rửa giải tủa
Tủa fucoidan EtOH : dịch rong = 2:1 Bột rong: 50g
Dịch rong được tách ra khỏi bã rong và cô đặc bằng thiết bị lọc rây phân tử MWCO 1kDa đến khi còn 50 ml.
Tủa nhựa benzalkonium chloride
Nhựa benzalkonium chloride được cho vào dịch trên đến khi không còn tạo kết tủa. Kết tủa được rửa với nước để loại bỏ laminaral và mannitol.
Rửa giải tủa
Sau đó dung dịch CaCl2 3M, NaCl 3M được đưa vào và đun nóng ở 600C, có khuấy trộn trong 2 giờ và để qua đêm. Muối benzalkonium chloride – fucoidan, benzalkonium chloride – alginic bị phá hủy giải phóng ra fucoidan, đồng thời caxi alginate được tách ra dưới dạng kết tủa. Ly tâm để thu dịch có chứa fucoidan.
Tủa fucoidan
Hai lần thể tích EtOH 900 so với thể tích dịch lọc được đưa vào và khuấy trộn trong 10 phút. Để lắng 24 giờ, kết tủa fucoidan tạo thành.
Gạn thu kết tủa và tiếp tục rửa bằng EtOH 80% đến khi không còn ion Cl-.
Sấy
Sấy tủa fucoidan ở 500C trong 18 giờ đến khối lượng không đổi.