B.trispora và tạo thành chất thơm trong phản ứng đồng oxy hóa sử dụng enzyme xanthine oxidase.
Điều kiện phản ứng đồng oxy hóa: Dung dịch chứa β-carotene tách chiết từ sinh khối nấm sợi B.trispora được hòa tan trong hỗn hợp dung dịch EDTA và
đệm phosphate, bổ sung cơ chất acetaldehyde và enzyme XO, lắc 250 vòng/phút, 37oC. Lấy mẫu phân tích hàm lượng β-carotene bằng phương pháp quang phổ và tách chiết chất thơm bằng diethyl ether và phân tích bằng sắc ký khí.
Bảng 3.5. Sự phân rã β-carotene sinh khối nấm sợi B. trispora và tạo thành chất thơm trong phản ứng đồng oxy hóa sử dụng enzyme xanthine oxidase
Hàm lượng các chất thơm (µg/ml) và hiệu suất chuyển hóa Hàm lượng β-carotene sử dụng (µg/ml) Thời gian (h) (%) β- carotene phân rã β-ionone HSCH (%) DHA HSCH (%) 0 0 - - - - 2 55.2 1.40 0.009 9511.00 63.4 4 57.9 - - 4106.55 27.4 6 61.0 - - 2247.79 15.0 15000.0 24 76.2 - - 3601.91 24.0
Kết quả được trình bày trong bảng cho thấy:
Khi thực hiện phản ứng đồng oxy hóa β-carotene tách chiết từ sinh khối nấm sợi Blakeslea trispora sử dụng enzyme xanthin oxidase và cơ chất tạo các
gốc tự do acetaldehyde, các gốc tự do tạo thành trong môi trường phản ứng đã tác động và phân cắt mạch cacbon của phân tử β-carotene. Sự phân rã diễn ra khá nhanh sau 2 giờ phản ứng có 55.2% β-carotene bị phân rã, sau đó quá trình diễn
58
ra chậm hơn và đạt 76.2% sau 24 giờ phản ứng. Sản phẩm chất thơm chủ yếu là DHA được tích tụ với hàm lượng rất cao sau 2 giờ phản ứng, đạt 9511.0 µg/ml, hiệu suất chuyển hóa là 63.4% so với lượng chất chiết ban đầu. Sau đó giảm nhanh còn 3601.9 µg/ml khi kết thúc phản ứng sau 24 giờ. β-ionone chỉ được phát hiện với một lượng rất nhỏ sau 2 giờ 1.4 µg/ml.
Từ kết quả trên có thể nhận thấy hàm lượng chất thơm DHA đạt được cao nhất sau 2 giờ khi đồng oxy hóa β-carotene tách chiết từ sinh khối nấm sợi
B.trispora. Nếu so sánh hiệu suất chuyển hóa tạo thành DHA của quá trình tự
oxy hóa là 19.8% thì quá trình đồng oxy hóa làm tăng hiệu suất chuyển hóa lên 43.6%.