a. Nguồn beta-carotene tinh khiết (tổng hợp)
Tiến hành:
150mg beta-carotene chuẩn + 1.8ml Tween 80 đồng hóa 3’ (24000 rpm) hòa tan hỗn hợp vào 100ml Hexan khuấy từ ở tốc độ trung bình trong 5’ cô quay chân không bay hơi dung môi và thu hồi cặn (ở áp suất 550 mm Hg, 150 rpm, 40ºC) hòa tan lại cặn trong 50ml đệm Phosphate (50mM, pH 8), EDTA 0.25% lọc và thu dịch trong lắc ( 37ºC, 250 rpm) và quét phổ.
b. Nguồn beta-carotene từ dầu Gấc.
Quy trình 1:
0.5 g dầu Gấc + 6 ml Tween 80 đồng hóa 3’ (24000 rpm) hòa tan hỗn hợp vào 100ml Hexan khuấy từ ở tốc độ trung bình trong 5’ cô quay chân không bay hơi dung môi và thu hồi cặn (ở áp suất 550 mm Hg, 150 rpm, 40ºC) hòa tan lại cặn trong 1000ml đệm Phosphate (50mM, pH = 8), EDTA 0.25% lọc và thu dịch trong lắc ( 37ºC, 250 rpm) và quét phổ.
Quy trình 2:
1,6 g dầu Gấc + 1.6 ml Tween 80 đồng hóa 3’ (24000 rpm) hòa tan hỗn hợp vào 100ml Hexan khuấy từ ở tốc độ trung bình trong 5’ cô quay
41
chân không bay hơi dung môi và thu hồi cặn (áp suất 550 mm Hg, 150 rpm, 40ºC) hòa tan lại cặn trong 80ml đệm Phosphate (50mM, pH 8), EDTA 0.25% được dung dịch A chia làm 2 bình:
+ Bình 1 (không pha loãng ): 50 ml A
+ Bình 2 (pha loãng 2.5f) : 20ml dung dịch A + 30ml đệm Phosphate (50mM, pH = 8), EDTA 0.25%.
lọc và thu dịch trong lắc (37ºC, 250 rpm) và quét phổ.
c. Nguồn beta-carotene từ nấm sợi.
Tiến hành :
3.0 g cặn sinh khối nấm sợi + 2 ml Tween 80 đồng hóa 3’ (24000 rpm) hòa tan hỗn hợp vào 100ml Hexan khuấy từ ở tốc độ trung bình trong 5’ cô quay chân không bay hơi dung môi và thu hồi cặn (150 rpm, 40ºC) hòa tan lại cặn trong 100ml đệm Phosphate (50mM, pH = 8), EDTA 0.25% lấy ra 50ml dung dịch cho vào bình tam giác lọc và thu dịch trong lắc (37ºC, 250 rpm) và theo dõi phổ trong 24h (cứ 2 giờ quét phổ 1 lần)