+ Định tính dựa trên nguyên tắc:
Thực hiện chức năng quét phổ trên máy UV-VIS: là chiếu chùm tia đơn sắc với một dãy các bước sóng qua dung dịch chất hấp thụ ánh sáng, khi đó các cấu tử trong dung dịch sẽ hấp thụ chọn lọc một số tia ở những bước sóng khác nhau tùy theo cấu trúc của mỗi chất. Bộ phận phân tích và hiển thị kết quả cho ta biết các thông tin về cực đại hấp thụ và hiển thị các phổ hấp thụ điện tử của các cấu tử trong dung dịch cần phân tích.
Nếu kết quả cho thấy cực đại hấp thụ và cường độ vân phổ hấp thụ điện tử của mẫu thử và mẫu chuẩn gần giống nhau trong khoảng bước sóng nhất định thì ta có thể định tính được mẫu nghiên cứu dựa trên mẫu chuẩn.
Ứng dụng vào định tính β-carotene và lycopene trong mẫu tách chiết bằng phương pháp quang phổ hấp thụ UV-VIS
Chuẩn bị dung dịch đo:
+ Mẫu phân tích: Là dung dịch đã tách chiết và định mức ở trên. + Mẫu chuẩn: Là mẫu β-carotene và lycopene tinh khiết.
Quét phổ:
Tiến hành quét phổ qua các dung dịch: mẫu đối chứng ( là dung môi sử dụng để pha mẫu : hexane, ethanol,...); mẫu phân tích và mẫu chuẩn trong khoảng bước sóng từ 300 – 550 nm.
43 lycopene 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 300 350 400 450 500 550 nm A b s lycopene chuan
mẫu lycopene phân tích
Hình 2.3. Phổ hấp thụ của Lycopene trong mẫu chuẩn và mẫu dầu Gấc
beta-carotene -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 300 350 400 450 500 550 nm A b s
beta-caroten chuẩn
mẫu beta-carotene phân
tích
Hình 2.4. Phổ hấp thụ của beta-carotene trong mẫu chuẩn và mẫu dầu Gấc + Định lượng dựa trên nguyên tắc:
Từ kết quả của quá trình quét phổ trên máy quang phổ UV-VIS , ta sẽ thu được file excel, trong file excel có chứa tất cả các giá trị hấp thụ của cấu tử phân tích
44
tại từng bước sóng của dải sóng. Từ đó ta sẽ tính được hàm lượng của carotenoids dựa trên công thức sẵn có.
Công thức tính hàm lượng carotene :
[carotene] (mg/g) = ( Abs 450 * V ) / ( 2592 * m ) Trong đó :
_ Abs 450 : là độ hấp thụ quang phổ của cấu tử phân tích tại bước sóng 450 nm
_ V là thể tích mẫu _ 2592 là E 1%/ 1cm
_ m: là khối lượng mẫu tách chiết