Chƣơng 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp
2.2.6. Tinh chế các đoạn DNA trên gel agarose
Để chuẩn bị nguyên liệu cho các phản ứng ghép nối gen với vector, ngồi vector pJET1.2 có sẵn trong bộ Kit tách dòng. Trong nội dung nghiên cứu này, chúng tôi cần phải chuẩn bị xử lý các vector biểu hiện, các sản phẩm PCR bằng cách điện di chúng trên gel 0,8% agarose, sau đó cắt phần gel có băng DNA mong muốn và thu lại DNA bằng Kit tinh sạch Wizard®SV. Quy trình tinh sạch DNA gồm các bước sau:
Làm tan gel:
Sau khi điện di xong, cắt phần gel chứa băng DNA tương ứng và chuyển gel vào ống eppendorf, xác định lượng gel đã cắt được.
Bổ sung dung dịch gắn màng với tỉ lệ: 10 μl dung dịch / 10 mg gel.
Voltex và ủ ở 65oC cho đến khi gel tan hoàn toàn.
Gắn DNA lên màng của cột tinh sạch:
Đưa cột SV vào ống Collection (cột tinh sạch).
Chuyển hỗn hợp gel đã tan vào cột tinh sạch và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 phút.
Rửa màng:
Bổ sung 700 μl dung dịch rửa màng (đã bổ sung cồn). Ly tâm 12000 vịng/phút trong 2 phút, loại bỏ phần dịch phía dưới cột Collection.
Rửa lại một lần bằng cách bổ sung tiếp 500 μl dung dịch rửa, ly tâm 12000 vòng/phút trong thời gian 5 phút. Loại bỏ phần dịch phía dưới cột Collection.
Thu DNA:
Nhẹ nhàng chuyển cột SV sang một ống eppendorf 1,5 ml sạch.
Bổ sung 50 μl nước khơng có nuclease, ủ ở nhiệt độ phịng trong 3 phút, ly tâm 12000 vòng/phút trong thời gian 2 phút.
Loại bỏ cột SV và giữa DNA ở 4oC hoặc -20oC.
Kiểm tra DNA bằng cách điện di trên gel agarose 0,8%.