PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phân lập các chủng vi sinh vật biển theo định hướng sinh enzyme cắt ngắn mạch fucoidan
Do sự đa dạng rộng lớn của điều kiện sống mà các vi sinh vật biển được coi là những nguồn các hợp chất có hoạt tính sinh học đầy tiềm năng và nhiều triển vọng, bao gồm các enzyme quý hiếm. Một số vi sinh vật biển có khả năng bẻ ngắn mạch polysaccharide không tan trong nước như kitin, agar cũng như các polysaccharide trong thành tế bào rong biển. Khi bị tổn hại trong quá trình bảo tố, rong nâu trở thành đối tượng tấn công của các vi sinh vật thủy sinh và các vi sinh vật này có hệ enzyme có khả năng bẻ ngắn mạch polysaccharide tồn tại trong thành tế bào rong về dạng mono và oligosaccharide. Các saccharide này được sử dụng không chỉ cho bản thân các vi sinh vật kí sinh ngoài, mà cho cả các vi sinh vật biển khác. Các glycosidase thường được sinh bởi các vi sinh vật cộng sinh, ví dụ như vi sinh vật thuộc chi Vibrio gắn với rong nâu Laminaria longicruris có khả năng thủy phân laminaran, trong khi đó vi sinh vật phân lập từ rong đỏ Polisophonia lanosa, Hupnea charoides và Gracilaria gracilis có khả năng thủy phân agar [50]. Như vậy, có thể cho rằng rong biển là một nguồn các chất dinh dưỡng cho các vi sinh vật ký sinh ngoài.
Dựa trên cơ sở tham khảo các tài liệu như đã trình bày trên, chúng tôi tiến hành phân lập vi sinh vật bẻ ngắn mạch fucoidan từ các nguồn rong nâu, nước biển và bùn biển nơi mà rong sinh sống. Sử dụng môi trường M1 với nguồn carbon duy nhất là fucoidan từ S. mcclurei để làm môi trường phân lập. Đây là môi trường phân lập có tính chọn lọc, vì vậy chủng vi sinh vật nào mọc được trên môi trường này thì có khả năng sinh enzym phân cắt fucoidan tạo nguồn dinh dưỡng cho bản thân vi sinh vật. Kết quả chúng tôi thu được thể hiện ở bảng sau:
Bảng 3.1: Các chủng vi khuẩn biển đã phân lập đƣợc.
STT Nguồn phân lập Kí hiệu chủng
Đặc điểm khuẩn lạc 1 Rong S. seratum
(3 chủng)
F1 Khuẩn lạc trắng, nhầy, bóng
2 F2 Khuẩn lạc trắng, tròn, có nhân
3 F3 Khuẩn lạc vàng, tròn, bóng
4 Rong S. mcclurei (3 chủng)
F4 Khuẩn lạc trắng sữa, nhầy, bóng
5 F5 Khuẩn lạc trắng, tròn, lồi
6 F14 Khuẩn lạc trắng sữa, trơn, bóng,
tròn, đường kính 1mm
7 Nước biển
(3 chủng)
F6 Khuẩn lạc trắng sữa, tròn, viền vàng
8 F7 Khuẩn lạc trắng sữa, dẹt
9 F8 Khuẩn lạc tròn, dẹt, vàng nhạt
10 Bùn biển
(3 chủng)
F9 Khuẩn lạc vàng, dẹt, viền trắng
11 F10 Khuẩn lạc trắng, bóng, lồi
12 F11 Khuẩn lạc trắng trong, tròn, đục
13 Rong S. microcystum (3 chủng)
F12 Khuẩn lạc trắng, nhầy bóng
14 F13 Khuẩn lạc trắng sữa, trơn, bóng,
tròn, đường kính 2mm 15 Rong S. polycystum
(2 chủng)
F15 Khuẩn lạc tròn, lồi, vàng nhạt, có viền sang xung quanh
16 F16 Khuẩn lạc dẹt, bóng, trắng trong,
hình bầu dục 17 Nước chiết fucoidan để lâu
ngày (5 chủng)
F17 Mốc đen
18 F18 Mốc vàng nâu
19 F19 Mốc xanh
20 F20 Mốc đen, viền trắng
21 F21 Mốc nâu
22 Rong Nâu tàn lụi không xác định được loài
(3 chủng)
F22 Mốc vàng
23 F23 Mốc vàng ở giữa, viền trắng
24 F24 Khuẩn lạc vàng cam
Chúng tôi đã phân lập được 24 chủng vi sinh vật biển bao gồm cả nấm mốc và vi khuẩn, mặc dù được phân lập trên môi trường giống nhau nhưng khuẩn lạc có hình dạng khác nhau nên có thể nhận xét sơ bộ đây là các chủng vi sinh vật khác nhau.
Những vi sinh vật phân lập được là những chủng đặc trưng cho vùng biển Nha Trang, Khánh Hòa nên sẽ tối thích ứng với việc bẻ ngắn mạch fucoidan được sản xuất tại Viện nghiên cứu và ứng dụng công nghệ Nha Trang. Do trong tự nhiên chính những chủng vi sinh vật này là những vi sinh vật sống cộng sinh trên cây rong được dùng làm nguyên liệu để sản xuất fucoidan.
Từ một nguồn phân lập là rong biển, nước biển, bùn biển và nước chiết fucoidan để lâu ngày có thể phân lập từ 2-5 chủng vi sinh vật như vậy là có thể có nhiều chủng vi sinh vật cùng sống cộng sinh trên cùng một cây rong.
So với các kết quả đã được công bố trên thế giới thì số lượng các chủng vi sinh vật chúng tôi phân lập được từ một nguồn rong là ít hơn. Trong khi đó các nhà khoa học Hàn Quốc đã phân lập được 185 chủng từ các nguồn từ các nguồn rong biển, nước biển và bùn biển [25]. Sự khác biệt này có thể được giải thích là do chúng tôi sử dụng môi trường phân lập có tính chọn lọc để hạn chế các chủng vi sinh vật không mong muốn giúp cho quá trình sàng lọc diễn ra nhanh hơn. Trong khi đó các nhà khoa học Hàn Quốc sử dụng môi trường phân lập có chứa nguồn dinh dưỡng dồi dào (bactopepton, dịch chiết nấm men) nên họ phân lập được hầu như các vi sinh vật sống trong môi trường biển.
Bên cạnh chúng tôi còn phân lập được các chủng nấm mốc, là chủng thường có họat tính enzyme ngoại bào, vì thế đây có thể là nguồn cung cấp enzyme hữu hiệu cho sản xuất công nghiệp.
3.2. Sàng lọc vi sinh vật biển theo định hướng sinh enzyme cắt ngắn mạch