Exserohilum turcicum
4.3.2. Kết quả nghiên cứu về nấm gây bệnh hại chính trên lá ngô
4.3.2.1. Nghiên cứu khả năng phát triển của nấm gây bệnh hại chính trên lá ngô trên một số môi trường nhân tạo khác nhau
Để chọn ra môi trường phù hợp nhất cho nấm sinh trưởng và phát triển chúng tôi tiến hành nuôi cấy nấm trên 2 loại môi trường WA (Water Agar) và PGA (Potato Glucose Agar). Kết quả thể hiện ở bảng 4.9 và 4.10.
Tất cả các thí nghiệm đều được đặt ở nhiệt độ 28,50C.
Bảng 4.9. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm
B.maydis trên môi trường PGA
Môi trường cấy
Đường kính tản nấm trung bình sau khi cấy (mm) 1 ngày 2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày WA 4,00±0,72 11,33±2,25 24,00±1,43 31,67±1,78 40,33±1,24 PGA 6,67±1,43 27,00±2,59 38,67±1,24 51,33±1,43 65,00±1,25
Bảng 4.10. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm
E.turcicum trên môi trường PGA
Môi trường cấy Đường kính tản nấm trung bình sau khi cấy (mm) 1 ngày 2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày WA 3,67±0,72 9,67±1,24 19,00±2,59 27,67±1,43 34,33±1,78 PGA 5,33±1,24 17,00±1,43 42,67±1,78 56,67±2,59 80,67±1,24 Kết quả cho thấy sau 5 ngày nuôi cấy cả 2 nấm nấm E.turcicum và nấm
B.maydis đều có kích thước tản nấm phát triển cao nhất ở môi trường PGA với giá trị ở nấm E.turcicum là 80,67, ở nấm B.maydis là 65,00. Ở môi trường WA đường kính tản nấm của nấm E.turcicum chỉ đạt 34,33 và của nấm B.maydis là 40,33. Đồng thời chúng tôi thấy khả năng hình thành bào tử của nấm ở môi trường PGA tốt hơn ở môi trường WA rất nhiều.
Vì vậy, chúng tôi đã sử dụng môi trường PGA để thực hiện nuôi cấy nấm và sử dụng để thực hiện thí nghiệm thử thuốc trên môi trường trong phòng thí nghiệm.
Khi đưa ra so sánh sự phát triển của nấm trên môi trường thuận lợi PGA qua bảng 4.11 và biểu đồ 4.1 ta có thể thấy nấm B.maydis bắt đầu phát triển sau 1 ngày nuôi cấy với đường kính là 6,67mm tốt hơn so với nấm E.turcicum là 5,33mm. Sau 3 ngày nuôi cấy nấm E.turcicum có sự phát triển vượt trội hơn hẳn nấm B.maydis và sau 5 ngày nuôi cấy thì kích thước đường kính tản nấm đạt tới 80,67mm cao hơn so với nấm B.maydis chỉ đạt là 65,00mm. Từ đây ta có thể thấy khả năng xâm nhiễm của nấm B.maydis tốt hơn nấm E.turcicum nhưng khả năng phát triển sau xâm nhiễm của nấm E.turcicum lại mạnh hơn.
Bảng 4.11. So sánh sự phát triển của nấm B.maydis và nấm E.turcicum trên môi trường nuôi cấy PGA
Tên nấm
Đường kính tản nấm trung bình sau khi cấy (mm) 1 ngày 2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày
B.maydis 6,67±1,43 27,00±2,59 38,67±1,24 51,33±1,43 65,00±1,25
Biểu đồ 4.1. Kết quả so sánh sự phát triển của nấm nấm B.maydis và E.turcicum trên môi trường nuôi cấy PGA
4.3.2.2. Ảnh hưởng của một số loại thuốc hóa học đến sự phát triển của một số nấm gây bệnh hại chính trên lá ngô ở các nồng độ khác nhau trên môi trường nhân tạp PGA
Nhằm tìm ra những loại thuốc có hiệu quả cao trong phòng trừ bệnh chúng tôi tiến hành thử nghiệm ảnh hưởng một số loại thuốc hóa học học đến sự phát triển của một số nấm gây bệnh, đây là một số loại thuốc được bán phổ biến trên địa bàn huyện Văn Yên, tỉnh Yên Bái. Kết quả được trình bày ở bảng 4.12 và bảng 4.13.
a. Ảnh hưởng của một số loại thuốc hóa học đến sự phát triển của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ ngô ở các nồng độ khác nhau trên môi trường nhân tạp PGA
Đối với nấm B.maydis chúng tôi tiến hành thí nghiệm trên 3 loại thuốc Anvil 5SC, Daconil 75WP, Tepro Super 300EC ở 3 nồng độ khác nhau 50ppm, 100ppm và 200ppm. kết quả thu được thể hiện ở bảng 4.12:
Bảng 4.12. Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của nấm
B.maydis trên môi trường PGA
Công thức thí nghiệm Nồng độ thuốc (ppm)
Đường kính tản nấm trung bình sau khi cấy (mm) 1 ngày 2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày
Anvil 5SC 50 0,67±0,72 1,33±1,24 3,67±1,43 6,33±2,15 10,00±1,78 100 0 1,00±0,72 2,67±1,24 5,33±1,43 9,33±0,72 200 0 0 1,00±0,72 2,33±1,78 5,67±0,72 Daconil 75WP 50 1,00±1,24 2,33±1,43 4,67±1,24 7,33±1,43 11,33±1,90 100 0 1,33±0,72 2,33±1,43 5,67±1,78 9,67±1,78 200 0 0 1,67±0,72 3,33±1,43 6,330,72 Tepro Super 300EC 50 1,67±1,43 3,67±1,24 7,33±1,78 12,00±2,15 20,67±1,43 100 1,00±0,72 2,33±1,43 5,67±1,24 9,67±1,78 16,67±2,15 200 0 1,33±0,72 3,33±1,43 7,00±2,15 11,67±1,24 Đối chứng 6,67±0,72 27,00±1,24 38,67±3,13 51,33±1,78 65,00±1,90 Kết quả cho thấy cả 3 loại thuốc trên đều có khả năng ức chế sự phát triển của nấm B.maydis trên môi trường PGA. Trên môi trường xử lý thuốc Anvil 5SC tản nấm mọc chậm nhất, ở nông độ 50 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm đạt 10,00mm; ở nồng độ 100 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm đạt 9,33 mm; ở nồng độ 200 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm chỉ còn 5,67 mm so với đối chứng là 65,00 mm. Thuốc Daconil 75WP có hiệu lực cũng khá cao, chỉ sau Anvil 5SC. Thuốc Tepro Super 300EC khả năng ức chế sự phát triển của nấm B.maydis kém nhất, tản nấm mọc nhanh nhất, ở nồng độ 50 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm lên tới 20,67 mm; ở nồng độ 100 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm là 16,67 mm và ở nồng độ 200 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm là 11,67 mm.
b. Ảnh hưởng của một số loại thuốc hóa học đến sự phát triển của nấm E.turcicum gây bệnh đốm lá lớn ngô ở các nồng độ khác nhau trên môi trường nhân tạp PGA
Cũng như với nấm B.maydis chúng tôi tiến hành thí nghiệm trên 3 loại thuốc Anvil 5SC, Daconil 75WP, Tepro Super 300EC ở 3 nồng độ khác nhau
50 ppm, 100 ppm và 200 ppm đối với nấm E.turcicum . Kết quả thu được thể hiện ở bảng 4.13:
Bảng 4.13. Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của nấm
Exserohilum turcicum trên môi trường PGA
Công thức thí nghiệm Nồng độ thuốc (ppm)
Đường kính tản nấm trung bình sau khi cấy (mm) 1 ngày 2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày
Anvil 5SC 50 1,00±0,72 2,33±1,24 4,00±1,43 8,33±1,90 12.67±1,78 100 0 1,00±0,72 2,67±1,24 6,00±1,78 10,33±1,24 200 0 0 1,00±0,72 4,00±1,43 6,67±0,72 Daconil 75WP 50 1,00±0,72 2,00±1,43 3,67±1,24 5,67±1,90 9,67±1,78 100 0 1,00±1,24 2,33±1,43 5,33±1,24 8,000,72 200 0 0 0,67±0,72 1,33±1,43 4,67±0,72 Tepro Super 300EC 50 1,67±0,72 4,00±0,72 8,33±1,43 13,33±3,13 22,33±2,15 100 1,00±1,24 3,33±1,43 7,33±2,15 12,67±1,24 19,67±1,78 200 0 1,33±0,72 4,33±1,43 8,33±1,78 13,67±1,43 Đối chứng 5,33±1,43 17,00±3,13 42,67±1,78 56,67±2,15 80,67±1,24 Kết quả cho thấy cả 3 loại thuốc trên đều có khả năng ức chế sự phát triển của nấm E.turcicum trên môi trường PGA. Cũng như thí nghiệm thử thuốc đối với nấm B.maydis thì Thuốc Tepro Super 300EC có khả năng ức chế sự phát triển của nấm E.turcicum kém nhất, tản nấm mọc nhanh nhất, ở nông độ 50 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm lên tới 22,33 mm; ở nồng độ 100 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm là 19,67 mm và ở nồng độ 200 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm là 13,67 mm so với đối chứng là 80,67mm. Đối với nấm
E.turcicum thì trên môi trường xử lý thuốc Daconil 75WP có khả năng ức chế sự phát triển của nấm nhất, ở nồng độ 50ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm đạt 9,67 mm; ở nồng độ 100 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm đạt 8,00 mm; ở nồng độ 200 ppm sau 5 ngày cấy đường kính tản nấm chỉ còn 4,67 mm. Thuốc Anvil 5SC có khả năng ức chế sự phát triển của nấm ở mức trung bình.
4.4. ĐÁNH GIÁ TÍNH GÂY BỆNH CỦA MỘT SỐ NẤM BỆNH HẠI LÁ CHÍNH TRÊN NGÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÂY BỆNH NHÂN TẠO CHÍNH TRÊN NGÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÂY BỆNH NHÂN TẠO 4.4.1. Đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô
Để đánh giá chính xác khả năng kháng nhiễm của các giống ngô thí nghiệm với bệnh này chúng tôi tiến hành 2 biện pháp lây nhiễm là phun bào tử nấm Bipolaris maydis đã được nuôi cấy và pha loãng với số lượng bào tử trên 104 – 105 bào tử/ml và phương pháp lây nhiễm trực tiếp bào tử trên lá để đánh giá chính xác khả năng lây nhiễm với các giống ngô thí nghiệm của loài nấm này. 4.4.1.1. Đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp phun bào tử
Chúng tôi tiến hành phun bào tử nấm B.maydis phân lập trên ngô phun trên ngô và lúa bằng bình phun sương, so sánh với đối chứng của từng giống khi phun nước lã trong điều kiện ẩm độ không khí cao, chúng tôi theo dõi số lượng bào tử xuất hiện sau 5 ngày, 10 ngày, 15 ngày. Kết quả được thể hiện ở bảng 4.14 và biểu đồ 4.6.
Bảng 4.14. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp phun bào tử
Giống
Số lượng vết đốm do nấm B.maydis gây bệnh trên ngô
5 ngày 10 ngày 15 ngày
HN68 2,67c 11,33b 13,67b
LVN885 4,00a 21,00a 23,67a
DK6919 4,33a 6,67c 10,00c
ĐC HN68 0 0 0
ĐC LVN885 0 0 0
ĐC DK6919 0 0 0
Biểu đồ 4.2. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp phun
bào tử
Qua kết quả của bảng 4.12 và biểu đồ 4.2 cho thấy sau khi phun bảo tử nấm Bipolaris Maydis sau 5 ngày phun bào tử số lượng vết bệnh trên giống ngô DK6919 là nhiều nhất với 4,33 vết sau đó là giống LVN885 là 4,00 vết và HN68 là 2,67 vết. Qua kết quả bảng cho thấy giống LVN885 có số lượng vết đốm tăng nhanh qua các ngày theo dõi, sau 15 ngày số lượng vết bệnh trên giống này là 23,67. Giống HN68 số lượng vết đốm sau 15 ngày lây bệnh là 13,67 vết đốm, giống DK6919 lại có số lượng vết đốm thấp nhất mặc dù nhiễm bệnh sớm nhất là 10,0 vết đốm. Các công thức đối chứng không thể hiện triệu chứng bệnh.
4.4.1.2. Đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm trực tiếp
Nấm Bipolaris Maydis được phân lập từ lá ngô bị bệnh đốm lá nhỏ và được cấy trên môi trường PGA sau đó lấy một phần thạch có chứa tản nấm và bào tử lây bệnh lên các giống ngô, chúng tôi theo dõi chiều dài vết bệnh và bán kính quầng vết bệnh sau 5 ngày, 10 ngày, 15 ngày để đánh giá tính kháng và nhiễm của nấm Bipolaris Maydis trên các giống ngô thí nghiệm. Kết quả lây bệnh nhân tạo được thể hiện bảng 4.15:
Bảng 4.15. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm trực tiếp
Giống
5 ngày 10 ngày 15 ngày
Chiều dài vết bệnh (mm) Bán kính quầng (mm) Chiều dài vết bệnh (mm) Bán kính quầng (mm) Chiều dài vết bệnh (mm) Bán kính quầng (mm)
HN68 1,1bc 1,8a 7,3b 1,9a 13,2b 1,9a
LVN885 2,1a 1,7a 8,9a 1,7b 21,6a 1,4b
DK6919 1,3b 1,3b 1,7c 1,4c 5,7c 1,4b
ĐC HN68 0 0 0 0 0 0
ĐC LVN885 0 0 0 0 0 0
ĐC DK6919 0 0 0 0 0 0
LSD 5% 0.2 0.4 0.4 0.1 1.3 0.2
Biểu đồ 4.3. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm B.maydis gây bệnh đốm lá nhỏ đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm
Qua bảng 4.15 và biểu đồ 4.3 tương tự như kết quả của phương pháp lây bệnh bằng phương pháp phun bào tử các giống ngô đều nhiễm nấm Bipolaris madis, công thức đối chứng không nhiễm sau 15 ngày theo dõi.
Chúng tôi đánh giá tính kháng nhiễm của các giống ngô thí nghiệm với nấm Bipolaris Maydis sau 5 ngày theo dõi giống ngô LVN885 có chiều dài vết bệnh lớn nhất 2,1 mm, bán kính quầng vết bệnh 1,7 mm. Giống ngô HN68 có chiều dài vết bệnh nhỏ nhất là 1,1 mm nhưng lại có bán kính quầng vết bệnh dài nhất 1,8 mm.
Chỉ tiêu bán kính quầng vết bệnh có vai trò trong sự phát triển của vết bệnh, sau khi các bào tử nấm xâm nhập thành công vào mô của cây và hình thành các sợi nấm len lỏi vào các mô xung quanh vết bệnh làm cho các mô xung quanh sung yếu và làm cho vết bệnh ban đầu phát triển rộng ra. Tùy vào sự kháng nhiễm của cây mà vết bệnh dài hay ngắn, quầng vết bệnh ban đầu càng lớn thì các mô chết hoại càng lan rộng.
Do vậy chiều dài vết bệnh đốm lá nhỏ trên giống HN68 có xu hương phát triển nhanh sau 10 ngày chiều dài vết bệnh 7,3 mm, bán kính quầng vết bệnh 1,9 mm; sau 15 ngày chiều dài vết bệnh 13,2 mm, bán kính 1,9 mm. Giống ngô LVN885 có chiều dài vết bệnh lớn nhất cả sau 15 ngày là 21,6 mm nhưng bán kính quầng vết bệnh có xu hướng giảm còn 1,4 mm khi vết bệnh trở lên già hơn. Giống DK6919 mặc dù có vết bệnh cao thứ 2 sau 5 ngày lây nhiễm với bán kính chiều dài vết bệnh 1,3 mm, nhưng bán kính quầng vết bệnh thấp chỉ 1,3 mm, sau 10 ngày chiều dài vết bệnh 1,7 mm, bán kính quầng vết bệnh 1,4 mm và sau 15 ngày lây nhiễm chiều dài vết bệnh nhỏ nhất chiều dài vết bệnh 5,7 mm, bán kính quầng vết bệnh 1,4 mm.
Hình 4.9. Lây bệnh nhân tạo B.maydis bằng phương pháp lây nhiễm trực tiếp
A. Vết bệnh trên giống LVN885 sau khi lây nhiễm 10 ngày
B. Vết bệnh trên giống DK6919 sau khi lây nhiễm 10 ngày
C. Vết bệnh trên giống HN68 sau khi lây nhiễm 10 ngày
D. Vết bệnh trên giống HN68 sau khi lây nhiễm 15 ngày
A B
4.4.2. Đánh giá tính gây bệnh của nấm E.turcicum gây bệnh đốm lá lớn đã phân lập lây nhiễm trên ngô
Để đánh giá tính kháng nhiễm bệnh đốm lá lớn trên một số giống ngô được trồng phổ biến ở Văn Yên chúng tôi cũng tiến hành phân lập nấm này từ các vùng trồng ngô tại huyện và lây nhiễm trên ngô bằng hai phương pháp phun bào tử và lây nhiễm nấm trực tiếp để có kết quả chính xác hơn về khả năng gây bệnh của nấm này.
4.4.2.1. Đánh giá tính gây bệnh của nấm E.turcicum gây bệnh đốm lá lớn đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm phun bào tử
Chúng tôi tiến hánh lây bệnh nhân tạo trong chậu vại, bào tử nấm
Exserohilum turcicum được nuôi cấy trên môi trường PGA, thu bào tử và pha loãng trong nước cất vô trùng với nống độ hơn 104 – 105 bào tử/ml. Phun trên giống ngô HN68, LVN885 và DK6919. Các công thức đối chứng của từng giống phun nước lã. Kết quả được thể hiện ở bảng 4.16 và biểu đồ 4.8:
Bảng 4.16. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm E.turcicum gây bệnh đốm lá lớn đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm
phun bào tử
Giống Số lượng vết đốm do nấm E.turcicum gây bệnh trên ngô
5 ngày 10 ngày 15 ngày
HN68 8,00a 8,67a 14,67b
LVN885 8,33a 9,00a 16,33a
DK6919 4,00b 5,33b 10,00c
ĐC HN68 0 0 0
ĐC LVN885 0 0 0
ĐC DK6919 0 0 0
LSD 5% 1,06 1,21 1,57
Qua bảng 4.16 và biểu đồ 4.4 sau 5 ngày lây nhiễm những giống ngô thí nghiệm HN68, LVN885 và DK6919 đều nhiễm bệnh đốm lá lớn với số vết bệnh cao nhất ở giống LVN885 với số vết đốm 8,3. Gần tương đương với số vết của
giống LVN885 là giống HN68 với 8 vết đốm. Và giống có số vết đốm thấp nhất là giống DK6919 chỉ có trung bình 4 vết đốm. Các giống này qua các ngày theo dõi số vết đốm lá lớn đều tăng lên sau 10 ngày số vết đốm lá lớn trên công thức thí nghiệm giống LVN885 là 9 vết đốm, giống HN68 là 8,67 vết đốm và ở giống DK6919 là 5,33 vết đốm.
Biểu đồ 4.4. Kết quả đánh giá tính gây bệnh của nấm E.turcicum gây bệnh đốm lá lớn đã phân lập lây nhiễm trên ngô bằng phương pháp lây nhiễm
phun bào tử
Như vậy, bằng phương pháp phun bào tử chúng tôi đã bước đầu đánh giá được khả năng kháng nhiễm của từng giống ngô thí nghiệm. Giống dễ nhiễm và có số vết đốm nhiều nhất là giống LVN885 sau 15 ngày với 16,33 vết đốm, giống