CHƢƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.3. Chƣng ninh bằng nồi áp suất để thu dịch chiết axit
Nguyên tắc: Phƣơng pháp chƣng ninh là phƣơng pháp lấy chất từ hỗn hợp bằng dung môi để tách biệt, cơ và tinh chế các cấu tử có trong hỗn hợp thành những cấu tử riêng. Đây là một trong những phƣơng pháp chiết tách đơn giản nhất. Có thể chƣng ninh từ hỗn hợp dung dịch hoặc từ chất rắn. Có thể sử dụng bình cấu có gắn sinh hàn hồi lƣu hay dùng nồi áp suất để chƣng ninh.
Chiết axit bằng phƣơng pháp chƣng ninh, dùng nồi áp suất: Cân chính xác khoảng 10g mẫu vỏ quả khô với V(ml) nƣớc cất cho vào trong nồi áp suất. Thực hiện chƣng ninh trong nồi áp suất. Thu đƣợc dung dịch chiết, phần bã rắn đƣợc chiết lặp lại một lần nữa để thu hồi tồn bộ lƣợng axit có trong mẫu. Dịch chiết thu đƣợc có màu nâu đỏ (hình 2.7). Trộn dịch chiết với 4 gam than hoạt tính và ngâm trong nƣớc ấm 30 phút, sau đó lọc than hoạt tính, rửa lại 2 lần, mỗi lần 10ml nƣớc để thu hồi hết axit. Dịch chiết sau khi xử lý bằng than hoạt tính bị mất màu hồn tồn (hình 2.8). Trộn lẫn dịch lọc và rửa, cô đặc đến 50ml, xử lý với 100ml etanol,
53
để yên 15 phút để kết tủa hết pectin (kết tủa màu trắng sữa) (hình 2.9). Lọc bỏ kết tủa. Phần kết tủa rửa 2 lần để thu hồi hết axit. Trộn các dịch chiết, cơ đặc đến thể tích 50ml và lƣu giữ ở 40
C trong tủ lạnh đến khi sử dụng để chuẩn độ, kiểm tra bằng HPLC.
2.3.4. Chuẩn độ tổng lƣợng axit thu đƣợc bằng phƣơng pháp chuẩn độ axit- bazơ
Pha chính xác 1 lít dung dịch NaOH chuẩn 0,1N từ fixanal, rồi sau đó dùng phễu rót vào buret sạch đến vạch số 0. Dùng pipet lấy vào 3 bình nón đã rửa sạch và tráng bằng nƣớc cất mỗi bình 5ml dung dịch chiết (đã đƣợc tẩy màu) và thêm 1- 2 giọt phenolphtalein. Tiến hành chuẩn độ cho đến khi dung dịch có màu hồng bền vững trong 30 giây.
Xác định hàm lƣợng axit tổng số trong vỏ quả bứa theo tiêu chuẩn TCVN 4589 - 88. Nhỏ NaOH 0,1N từ buret xuống, cho đến khi dịch thử có màu hồng nhạt bền vững.
Tính kết quả: Độ axit tồn phần theo phần trăm (X1) tính bằng cơng thức:
Trong đó:
n : số ml NaOH 0,1N sử dụng để chuẩn độ V ml dịch thử. Vcd : thể tích mẫu cơ đặc (ml);
P : trọng lƣợng mẫu thử, tính bằng gam; K: hệ số của loại axit, K = 0,006904.
P V Vcd n K X . . .100 1 Hình 2.9. Kết tủa pectin Hình 2.8. Dịch chiết
sau khi tẩy màu Hình 2.7. Dịch chiết
54
Dùng phƣơng pháp chuẩn độ để xác định tổng lƣợng axit hữu cơ có trong mẫu chiết.