CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.3. XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG HCA TRONG MẪU CHƢNG NINH
PHƢƠNG PHÁP HPLC
Phƣơng pháp chuẩn độ axit - bazơ có thể sử dụng để xác định axit hữu cơ trong dịch chiết, phƣơng pháp này giúp ta xác định đƣợc tổng lƣợng axit có trong dịch chiết. Tuy nhiên, trong phƣơng pháp này không thể định lƣợng axit (-) hydroxycitric và axit citric một cách riêng biệt. Ta cũng có thể xác định các axit bằng phƣơng pháp sắc kí khí, trong phƣơng pháp sắc kí khí ta phải sấy mẫu. Nhƣng axit HCA sẽ bị lacton hố khi có tác nhân nhiệt. Trong phƣơng pháp sắc kí lỏng cao áp, ta có thể định lƣợng HCA và các axit hữu cơ khác mà không cần phải cô đặc, sấy, hoá hơi dung dịch chiết. Đây là điểm thuận lợi để có thể định lƣợng (-)-HCA và các axit hữu cơ một cách riêng biệt.
3.3.1. Kết quả xây dựng đƣờng chuẩn
Chuẩn bị 5 dung dịch chuẩn HCCa có nồng độ thay đổi từ 115ppm đến 1148ppm. Kết quả xây dựng đƣờng chuẩn đƣợc thể hiện qua hình 3.3.
Phƣơng trình đƣờng chuẩn: y = 2268,2x – 138,11. Trong đó: y: diện tích pic của HCA.
x: nồng độ HCA.
Hệ số tƣơng quan R2 = 0,9999. Với giá trị hệ số tƣơng quan này, có thể nhận thấy phƣơng trình đƣờng chuẩn đƣợc xây dựng rất sát với thực tế.
69 y = 2268.2x - 138.11 R2 = 0.9999 -500000 0 500000 1000000 1500000 2000000 2500000 3000000 0 200 400 600 800 1000 1200 1400
Hình 3.3. Đường chuẩn HCA
3.3.2. Kết quả xác định HCA trong vỏ quả bứa khô
Mẫu đƣợc chuẩn bị bằng cách pha loãng theo tỉ lệ 1:100 với nƣớc cất 2 lần. Thể tích mỗi mẫu đƣợc tiêm vào HPLC là 20µl, HCA thu trực tiếp dựa vào diện tích pic bằng cách áp dụng hệ số pha loãng và sử dụng đƣờng chuẩn.
Pic của chất chuẩn có thời gian lƣu là 4,912 phút (hình 3.4), thời gian lƣu của axit HCA chiết đƣợc là 4,965 phút (hình 3.5).
Hình 3.4. Sắc ký đồ của chất chuẩn
area
70
Hình 3.5. Sắc ký đồ mẫu vỏ bứa khô chưng ninh trong nước
Thành phần axit HCA xác định bằng phƣơng pháp HPLC đƣợc tính bằng cơng thức sau: CHCA (ppm) = (A + 138,11)/2268,2
Lƣợng HCA (g/100g) = CHCA (ppm)*Vcđ*Kpl*f/(10000*Mm) Trong đó: CHCA (ppm): Nồng độ HCA tính bằng ppm
A : Diện tích pic sắc ký Vcđ : Thể tích mẫu cơ đặc (ml) Kpl : Hệ số pha loãng
f : Hệ số chuyển đổi giữa HCCa và HCA
(f = 2MHCA/MHCCa)
Mm : Trọng lƣợng mẫu thử (g) Kết quả đƣợc thể hiện ở bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả xác định axit HCA trong vỏ quả bứa bằng HPLC
TT mẫu m (g) y Vcđ Kpl HCA (%) HCA (%) 1 10,013 892293 50 100 15,421 15,367 2 10,009 887465 50 100 15,310 3 10,011 890912 50 100 15,4
71
Nhận xét: Lƣợng axit HCA trung bình chƣng ninh từ vỏ bứa khơ Phong Điền – Thừa Thiên Huế bằng 15,367%. So sánh với các kết quả của các loài đã nghiên cứu trên thế giới nhƣ Garcina India (12,48-15,1%), Garcina Cowa (27,1%), thì hàm lƣợng HCA chiết từ vỏ quả bứa khô Phong Điền – Thừa Thiên Huế có giá trị trung bình.