CHƯƠNG 3 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4 Phương pháp định tính thành phần hóa học
3.4.1 Chuẩn bị dịch chiết
Tiến hành định tính theo quy trình phân tích thành phần hóa thực vật đã được cải tiến và sửa đổi từ quy trình phân tích của Ciuley (Trường Đại học Dược khoa Bucarest, Rumani) nhằm xác định các hợp chất có trong các dịch chiết MeOH, EtOH 96% và EtOH 60% để đánh giá sơ bộ thành phần hóa học hoa Sài đất ba thùy [156].
Mỗi 2 g bột dược được chiết tương tự với các dung môi tương tự như quy trình chiết cao đã nêu ở trên. Dịch chiết được cơ quay đến cịn khoảng 20 mL.
3.4.2 Khảo sát sự hiện diện của các nhóm hợp chất có trong các loại cao chiết3.4.2.1 Khảo sát sự hiện diện của alkaloid 3.4.2.1 Khảo sát sự hiện diện của alkaloid
Lấy khoảng 5 mL dịch chiết cho vào chén sứ, bốc hơi tới cắn. Hòa cắn trong
4 mL dung dịch HCl 5%. Chia dung dịch acid vào 4 ống nghiệm nhỏ. Thực hiện định tính alkaloid bằng các thuốc thử Wagner.
So sánh kết quả với ống nghiệm đối chứng khơng có thuốc thử, nếu dung dịch đục hoặc có tủa: Có alkaloid.
3.4.2.2 Khảo sát sự hiện diện của flavonoid
Lấy khoảng 3 mL dịch chiết cho vào 1 ống nghiệm lớn. Thêm vào vài giọt dung dịch NaOH loãng. Dung dịch sẽ chuyển sang màu vàng. Thêm vài giọt H2SO4 lỗng, màu vàng sẽ biến mất hoặc khơng màu. Chứng tỏ có sự hiện diện của flavonoid.
a. Tác dụng với dung dịch NaOH 1%/EtOH
Nhỏ 0,5 mL dung dịch NaOH 1%/EtOH vào 3 mL dung dịch cao chiết. Sẽ có màu từ vàng-cam-đỏ. Nếu là flavon, isoflavon, flavanon, chalcon, leucoanto- cyanydin sẽ có màu vàng; flavonol cho màu từ vàng đến cam; auron cho màu đỏ đến đỏ tím.
b. Tác dụng với dung dịch H2SO4 đậm đặc
Nhỏ 0,5 mL dung dịch H2SO4 đậm đặc vào 3 mL dung dịch cao chiết. Nếu có flavon và flavonol sẽ cho màu vàng đậm-cam và có phát huỳnh quang đặc biệt; chalcol và auron cho màu đỏ hoặc xanh dương-đỏ; flavanol cho màu cam đến đỏ.
3.4.2.3 Khảo sát sự hiện diện của saponin
Mỗi 3 mL được cho vào 2 ống nghiệm riêng biệt: Ống 1: 5 mL HCl 0,1N (pH=1) + 3 giọt dung dịch thử. Ống 2: 5 mL NaOH 0,1N (pH=13) + 3 giọt dung dịch thử.
38
Bịt miệng ống lắc mạnh trong 1 phút, để yên, quan sát các cột bọt bong bóng trong cả 2 ống nghiệm. Nếu cột bọt cả 2 ống nghiệm bằng nhau và bọt có độ bền như nhau, có thể có saponin triterpen. Nếu ống pH 13 có cột bọt cao hơn nhiều so với ống pH 1 có thể có saponin steroid.
3.4.2.4 Khảo sát sự hiện diện của các chất khử
Nhỏ 0,5 mL dung dịch thuốc thử Tollens vào 3 mL dung dịch cao chiết. Sẽ có hiện tượng bạc bám vào thành ống nghiệm hoặc kết tủa đen nếu có đường khử.
3.4.2.5 Khảo sát sự hiện diện của các acid hữu cơ
Lấy 2 mL dịch chiết cho vào một ống nghiệm. Thêm vào dung dịch một ít tinh thể Na2CO3. Nếu có các bọt khí nhỏ sủi lên từ các tinh thể Na2CO3: Có acid hữu cơ.