Sản phẩm phản ứng PCR được điện di trên thạch agarose 1,5% có bổ sung ethidium bromide.
Các bước chuẩn bị thạch agarose:
1. Tiến hành lắp khay và lược vào bể điện di. 2. Chuẩn bị gel agarose 1,5%:
Cân 1,5 gam agarose hòa vào 100 ml dung dịch đệm TBE 1X trong bình Schott chịu nhiệt.
Đun sôi 5 phút hoặc hơn cho tới khi agarose tan hết
Để nguội đến khoảng 500C
Bổ sung 6 µl Ethidium Bromide
Xoay, lắc nhẹ bình (tránh tạo bọt) để trộn đều Ethidium Bromide 3. Rót hỗn hợp trên vào khay và để một khoảng thời gian 30 phút để gel
đông lại.
4. Sau khi gel đông, tháo lược, ta được một dãy các giếng tra gel. Đổ dung dịch đệm TBE vào bể điện di cho ngập mặt gel.
5. Tiến hành tra mẫu vào các giếng, mỗi giếng 10 µl mẫu.
6. Tra DNA ladder, đối chứng dương (chứa DNA chuẩn của vi khuẩn
Chlamydophila psittaci) và đối chứng âm vào các giếng. 7. Đậy nắp buồng điện di và cắm 2 điện cực vào.
Chú ý khi cắm điện cực phải cắm đầu âm ở vị trí các giếng, còn đầu dương là đầu còn lại vì DNA mang điện tích âm sẽ di chuyển về phía điện tích dương.
8. Điện di với hiệu điện thế 115V trong 45 phút.
Đọc kết quả: Sau khi điện di, thạch agarose được đưa vào máy đọc kết quả điện di để xác định kết quả điện di. Sản phẩm của phản ứng PCR thực hiện thành công là những vạch trắng hiện lên dưới tác động của tia UV trong máy đọc điện di. Ngược lại, đối với các phản ứng PCR không thành công, kết quả điện di là những vạch trắng rất mờ hoặc không có vạch trắng.
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN