Ống nghiệm Đối chứng 1 2 3 4 5 6 Nồng độ(µg/ml) 0 100 200 300 400 500 600 Dung dịch N_acetyl_glucose_amin 0.1%(ml) 0 1 2 3 4 5 6 Nước cất(ml) 10 9 8 7 6 5 4 - Chọn những ống nghiệm có cùng kích cỡ.
Trang 46 - Từ dịch pha loãng trên hút 1ml vào 1 ống nghiệm khác thêm vào 1ml thuốc thử DNS.
- Đun sôi trong vòng 5’ rồi làm lạnh đến nhiệt độ thường. - Thêm vào 5ml nước cất.
- Đo ở bước sóng 540nm.
- Vẽ đồ thị đường chuẩn biểu diễn tương quan giữa nồng độ N_acetyl glucose_amin và hiệu số mật độ quang (∆OD = OD – OD đối chứng).
Tiến hành định lượng dịch đường: làm tương tự như trên, thay dịch pha loãng bằng dịch đường cần đo.
2.2.8 Phương pháp khảo sát khả năng chịu cồn của nấm men:
Cấy nấm men vào môi trường khảo sát khả năng chịu cồn. Quan sát chủng nào có khả năng mọc được trên môi trường có độ cồn cao thì chọn chủng đó để khảo sát hoạt tính và định danh.
2.2.9 Phương pháp khảo sát nồng độ đường thích hợp cho tăng trưởng:
Cấy nấm men vào môi trường khảo sát nồng độ đường thích hợp.
Đối với môi trường thạch thì dùng phương pháp cấy ria và sau vài ngày quan sát bằng mắt thường, nếu là môi trường lỏng thì đếm số lượng tế bào.
Môi trường lỏng : hòa 1-2 khuẩn lạc vào 5ml nước cất, sau đó hút 0.1ml cho vào ống nghiệm chứa 5ml môi trường khảo sát khảo sát nồng độ đường.
2.2.10 Phương pháp đếm số lương tế bào bằng phòng đếm hồng cầu:
Mẫu ở trạng thái lỏng : Pha loãng mẫu theo dãy thập phân:
Trang 47
Đếm trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu :
Đếm số lượng tế bào trong 5 ô lớn (80 ô con) ở phòng đếm hồng cầu, tính số lượng tế bào theo công thức.
Số lượng tế bào /ml = A: số tế bào trong 5 ô lớn (80 ô nhỏ) B:số ô con trong 5 ô lớn = 80
103:số chuyển mm3 thành cm3 hay ml n: số lần pha loãng
Lưu ý: số tế bào trong mỗi ô lớn của buồng đếm phải nằm trong khoảng 10 – 100 để đảm bảo độ chính xác của phương pháp
2.2.11 Phương pháp làm bánh men và nấu rượu:
Bánh men: Theo công thức 1: Bột gạo 1kg, thuốc bắc 20.5gr, nấm mốc 106-108 tế
bào/g, nấm men 106-108 tế bào/g , nước 580ml. Bảng thành phần thuốc Bắc:
Tên Việt Nam Tên Khoa Học Khối lượng
Quế Cinnamomum cassia Blume 7gam
Đại hồi Illicium verum Hook 6gam
Tiểu hồi Noeniculum vulgare Will 5gam
Thảo quả Amomum Tsao – Ko C. et L. 1.5gam
Sa nhân Amomum villoxum Lour 1gam
Thu sinh khối nấm mốc và nấm men.
Nấm mốc + bột gạo sản phẩm 1 đếm số lượng tế bào. Nấm men + bột gạo sản phẩm 2 đếm số lượng tế bào. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trang 48 Trộn sản phẩm 1 + sản phẩm 2 + thuốc bắc xay nhuyễn bánh men.
Trộn sản phẩm sao cho trong bánh men có chứa số tế bào nấm men là106 /1g bột gạo và số tế bào nấm mố cũng là106 /1g bột gạo.
Lên men rượu: Đối với rượu nếp than:
Gạo nếp than → Xử lý → Nấu chín → làm nguội ↓
Bánh men thuốc bắc → Nghiền mịn → Phối trộn ↓ Lên men ↓ Làm nhuyễn ↓ Hãm cồn ↓ Thành phẩm
Trang 49
Chương 3:
Trang 50
3.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VÀ LÀM THUẦN:
Từ 7 mẫu bánh men, phân lập được 14 chủng nấm men và 12 chủng nấm mốc.