M Ở ĐẦU
3.1.Các dấu hiệu chính của bệnh đốm trắng nội tạng ở cá chim vây vàng (Trachinotus
c. Nhuộm các tiêu bản mô bệnh họ
3.1.Các dấu hiệu chính của bệnh đốm trắng nội tạng ở cá chim vây vàng (Trachinotus
(Trachinotus blochii) nuôi tại Vũng Ngán, trên vịnh Nha Trang.
Từ tháng 7 đến tháng 10/ 2010, đã có 47 con cá bị bệnh với các dấu hiệu bộc lộ rõ ràng và 10 con cá khỏe, kích thước của cá từ 8-14cm, được thu từ các lồng nuôi thử nghiệm loài cá CVV trên vịnh Nha Trang.
Có một số dấu hiệu của bệnh được bộc lộ ra bên ngoài như: có nhiều nốt phồng rộp nhỏ từ phía dưới của da nhô lên, khi các nốt phồng này vỡ ra tạo nên các nốt thương tổn nhỏ màu nâu (hình 3.1). Mang cá tiết nhiều dịch nhày, có các đốm trắng nhỏ (kích thước đốm trắng 1-2mm) trên mang và đôi khi trên mang cá bệnh tồn tại các vùng bị thương tổn do hoại tử (hình 3.2). Một số con cá bệnh xuất hiện các khối u nằm dọc cột sống (hình 3.3), khi khối u này lớn lên gây chèn ép làm cơ thể cá mất đi hình dạng bình thường, cơ thể bị cong gập dị dạng (hình 3.4.). Da cá bệnh mất màu sáng bạc bình thường do mất nhớt. Mắt thường bị xuất huyết, một số con có hiện tượng lồi mắt. Các vây bụng, vây ngực, vây lưng có hiện tượng xơ mòn. Những con bệnh nặng có bụng to và cứng.
Giải phẫu trong ổ bụng của cá bệnh, nhiều đốm trắng nhỏ (đường kính 1 – 2mm) xuất hiện nhiều ở gan, lách và thận của cá bệnh đã được quan sát. Ở một số con, các đốm trắng dạng u hạt còn tìm thấy bám ở trên bề mặt của bóng hơi, ở màng treo ruột hay ở xoang bụng. Đa phần những con cá bị bệnh có đầu thận bị sưng to gấp 2-3 lần so với cá khỏe và gan có hiện tượng có hiện tượng xung huyết. (hình 3.5)
Cá CVV thường bị bệnh ở giai đoạn cá còn nhỏ, gặp nhiều ở cá có kích thước từ 7 – 15 cm chiều dài. Bệnh này thường hay xảy ra sau khi thả cá ra lồng được 1-2 tháng nuôi. Cá bệnh có một số biểu hiện bất thường về tập tính sống như: bỏ ăn, bơi tách khỏi đàn, thường bơi lờ đờ trên tầng nước mặt. Một số con có biểu hiện bơi không định hướng, bơi xoắn nhiều vòng trên mặt nước. Cá bệnh thường chết sau 3-4 ngày kể từ khi
xuất hiện dấu hiệu bệnh lý đầu tiên. Tỷ lệ cá chết tích lũy của cá dao động từ 30 – 70% (hình 3.6)
Bảng 3.1. Các dấu hiệu chính của bệnh đốm trắng trong nội tạng ở cá chim vây vàng đã quan sát được bằng mắt thường (n=47 con cá bệnh)
TT Các dấu hiệu chính của bệnh Tần số
gặp
(%)
** Các dấu hiệu quan sát từ bên ngoài 47 100
1 Xuất hiện các nốt phồng nhỏ trên da 42 89,3 2 Mang bị hoại tử và tiết nhiều dịch nhầy 30 63,8 3 Xuất hiện các đốm trắng đục nhỏ trên mang 14 29,8 4 Xuất hiện khối u dưới da, dọc theo cột sống 23 48,9 5 Cơ thể có khối u lớn nên bị uốn cong, dị dạng 9 19,1 6 Các nốt phồng bị vỡ ra tạo vết thương tổn nhỏ 33 70,2
** Các dấu hiệu quan sát trong ổ bụng 47 100
1 Đốm trắng xuất hiện ở thận cá bệnh 27 57,4
2 Đốm trắng xuất hiện ở lách cá bệnh 23 48,9
3 Đốm trắng xuất hiện ở gan cá bệnh 24 51,1
4 Gan cá có hiện tượng xung huyết 11 23,4
5 Đốm trắng xuất hiện ở mạng treo ruột và bóng hơi
7 14,9
Hình 3.1: Cá bị bệnh xuất hiện các nốt phồng rộp dưới da, sau một thời gian nốt phồng vỡ ra tạo ra các thương tổn nhỏ mẫu nâu xám .
- Các nốt phồng rộng ở da (mũi tên nhỏ)
- Các nốt phồng đã vỡ, tạo ra các vết thương tổn nhỏ mà xám (mũi tên lớn)
c
Hình 3.2. Bệnh lý bộc lộ ở mang của cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng
a. Mang cá bệnh tiết nhiều dịch nhày và có các hạt trắng ở trên các tơ
mang
b. Mang cá có các vùng thương tổn do hoại tử
a b
a b
Hình 3.3 : Hình ảnh các khối u cột sống được lộ diện khi đã bóc đi phần cơ .
a. Khối u nằm trên cột sống, gần đuôi, xuất (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
hiện nhiều đốm trắng đục trên bề mặt
của khối u. Trên da cũng có các nốt
phồng rộp.
b. Khối u nằm trên cột sống nhưng ở phần
giữa cơ thể, có lớp trắng đục bao phủ
bên ngoài của khối u.
c. Có nhiều khối u nhỏ đang xuất hiện dọc
cột sống của cá bệnh
a b
c
Hình 3.4. Khối u ở cột sống là cá bệnh bị dị dạng (a); Trên cơ thể của 1 con cá bệnh có thể cùng lúc xuất hiện nhiều dấu hiệu khác nhau của bệnh: u cột sống, các nốt phồng rộp ở da và các thương tổn ở mang (b).
Hình 3.5. Các dấu hiệu gặp trong nội tạng của cá CVV bị bệnh:
a &b: nhiều hạt trắng nhỏ xuất hiện ở
gan của cá bệnh.
c & d: nhiều hạt trắng nhỏ đã xuất hiện ở lách cá bệnh, làm tổ chức này sưng to hơn bình thường
e. Nhiều hạt trắng nhỏ gặp ở đầu thận
của cá bị bệnh
a
c d
e b
3.2. Kết quả nghiên cứu mô bệnh học ở cá chim vây vàng bị bệnh đốm trắng nội tạng
Có 5 con cá bệnh và 5 con cá khỏe được đưa vào nghiên cứu mô bệnh học để phát hiện các biến đổi bệnh lý trong mô của các tổ chức cơ quan ở cá CVV bị bệnh. Trong các lát cắt của thận, lách và gan của cá bệnh (với thuốc nhuộm Hematoxylin & Eosin), đã biểu hiện một dạng bệnh lý giống nhau, đó là có rất nhiều các thương tổn dạng u hạt và nhiều tế bào máu tấn công và bao vây xung quanh các vị trí thương tổn này. Dạng thương tổn này đôi khi xuất hiện dày đặc trên các tiêu bản mô bệnh học của thận, gan và lách và chắc chắn các thương tổn này tương ứng với sự tồn tại của các hạt trắng (còn gọi là các đốm trắng) trong các cơ quan này đã được phát hiện bằng mắt thường và đã được trình bày ở mục 3.1. (hình 3.7; hình 3.8; hình 3.9)
Đặc biệt, ở các tiêu bản mô bệnh học làm từ khối u xương sống của cá bệnh, các thương tổn dạng hạt đã quan sát thấy ở gan, lách và thận cũng gặp tồn tại ở các khối u xương này, nhưng vùng thương tổn lớn hơn, chèn ép làm biến dạng các tế bào của mô xương (hình 3.10).
Các biến đổi mô bệnh học ở mang của cá CVV bị bệnh lại được đặc trưng bởi sự kết dính của các tơ mang thứ cấp do dịch nhày, điều này làm giảm sự trao đổi khí qua mang của cá bệnh, điều này đã giải thích hiện tượng cá bệnh thường nổi lên tầng mặt. Ngoài ra, sự phì đại của các tơ mang sơ cấp, sự cong keo các đầu mút của các tơ mang thứ cấp do sự phình to của các tế bào biểu mô tại đây cũng đã được quan sát. Ở một số tiêu bản khác, sự hoại tử của một phần các tơ mang cũng được quan sát thấy khá rõ ràng (hình 3.11).
Bệnh lý ở cơ tại các vị trí bị phồng rộp và thương tổn dưới da cũng đã được xem xét. Những vùng mô cơ bị hoại tử, thay vào đó là các thương tổn dạng u hạt giống như đã quan sát thấy ở thận, gan và lách cũng tồn tại ở đây. (hình 3.12)
Hình 3.7: Biến đổi mô bệnh học trong tổ chức gan cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng
a. Mô học của tổ chức gan ở cá khỏe (nhuộm với H&E, phóng đại 100x) b. Các thương tổn dạng u hạt tồn tại nhiều trong tổ chức gan của cá bệnh
a b
Hình 3.8: Các biến đổi mô bệnh học ở lách của cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
a. Mô học của lách ở cá khỏe (nhuộm với H&E, độ phóng đại 400x)
b. Nhiều thương tổn dạng u hạt tồn tại
trong tổ chức lách của cá bệnh (nhuộm với H&E, độ phóng đại 100x)
c. Các thương tổn dạng u hạt tồn tại nhiều
trong tổ chức lách của cá bệnh (nhuộm với
H & E, phóng đại 400x)
a b
a a
Hình 3.9: Biến đổi mô bệnh họcở thận cá chim vây vàng bị bệnhđốm trắng nội tạng
a. Mô thận của cá chim vây vàng khỏe nhuộm
với H &E (phóng đại 400x)
b. Mô thận của cá bệnh với rất nhiều các
vùng thương tổn dạng u hạt (nhuộm với H &E,
phóng đại 100x)
c. Các thương tổn dạng u hạt rất đặc thù gặp
ở mô thận (nhuộm với H&E và phóng đại)
a b
c
Hình 3.10 : Biến đổi mô bệnh học ở vị trí xương xuất hiện khối u (với H &E)
a. Khối u trên xương sống cá chim vây
vàng bị bệnh (luộc chín, gỡ thịt)
b. Mô học bình thường của xương sống, (phóngđại 400x),
c. Thương tổn dạng u hạt bắt màu tím của thuốc nhuộm hematoxylin chiếm chỗ trong mô xương, chèn ép, dồn nén các tế bào xương (phóng đại 400x)
Hình 3.11 : Các biến đổi mô bệnh họcở tổ chức của mang cá CVV bị bệnh.
a. Các tơ mang sơ cấp và thứ cấp ở cá khỏe, tơ mang thứ cấp thẳng, giữa 2 tơi mang thứ cấp có khoảng trống cho phép trao đổi nước (phóng đại 400x)
b. Tơ mang sơ cấp phình to, đầu mút các tơ
mang thứ cấp cong keo và dính bết vào nhau do dịch nhày ( phóng đại 400x)
c. Hiện tượng hoại tử xảy ra từng vùng trên các tơ mang (phóng đại 100x)
(Các tiêu bảnđược nhuộm với H & E)
b (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
c a
a b
Hình 3.12: Đặc điểm mô bệnh học của cơở dướiđiểm bị phồng rộp và thương tổn của cá chim vây vàng bệnhđốm trắng nội tạng
a. Cơ khỏe với các sợi cơ xếp thành bó và bắt màu hồng của thuốc nhuộm Eosin
(Nhuộm bằng H &E, độ phóng đại 400x, mũi tên trắng)
b. Cấu trúc của hệ cơ bị phá vỡ thay vào đó các thương tổn dạng hạt xuất hiện, bắt màu
tím của thuốc nhuộm Hematoxylin và gia tăng sự xâm nhập của các tế bào máu (Nhuộm
Thảo luận 1:
Từ các dấu hiệu bệnh quan sát bằng mắt thường ở cá CVV bị bệnh như đã trình bày ở mục 3.1 và 3.2, chúng tôi nhận thấy, sự xuất hiện của các nốt phồng rộp ở da, các đốm trắng nhỏ ở mang và các nội tạng như lách, thận, gan và các khối u lớn hoặc nhỏ nằm dọc cột sống là những dấu hiệu đặc thù cho bệnh gây chết cá chim vây vàng cỡ 8- 15cm nuôi trong các lồng thử nghiệm trên Vịnh Nha Trang, Khánh Hòa năm 2010.
Các biến đổi bệnh lý trong mô của các tổ chức cơ quan của cá bệnh được đặc trưng bởi sự xuất hiện của nhiều vùng thương tổn dạng u hạt trong mô của gan, thận, lách, cơ và ở các u xương trên cột sống của cá bệnh. Các dạng thương tổn này giống nhau ở nhiều tổ chức cơ quan, điều này chứng minh rằng cá CVV nuôi tại Nha Trang đã bị chết do một dạng bệnh nhiễm trùng hệ thống.
Đã có nhiều công trình của các tác giả trong và ngoài nước nghiên cứu về các chứng bệnh khác nhau ở cá xương có biểu hiện bệnh lý là các đốm trắng xuất hiện ở trên hay trong các cơ quan và các thương tổn dạng u hạt được phát hiện trên các tiêu bản mô bệnh học như bệnh mủ ở gan thận của cá tra nuôi ở ĐBSCL (Trần Thị Minh Tâm & ctv, 2003; Lý Thị Thanh Loan & ctv, 2007; Đồng Thanh Hà, 2008; Nguyễn Thị Thương, 2009), bệnh Photobacteriosis xảy ra ở cá giò nuôi tại Đài Loan và Việt Nam (Đỗ Thị Hòa & ctv, 2008), bệnh Nocardiosis xảy ra ở cá CVV và nhiều loài cá biển
Hình 3.13: Các thương tổn dạng hạt được nhuộm bằng phương pháp Ziehl- Neelsen (độ phóng đại 400x ). Các vật chất kháng acid bắt màu hồng ở bên trong vùng thương tổn
khác nhau ở Malaysia, Trung Quốc và Singapore (Labrie & ctv, 2008), bệnh Mycobacteriosis ở nhiều loài cá (Nigrelli và Volgel, 1963). Tất cả những nghiên cứu này đều đã chứng minh rằng nhiễm vi khuẩn hệ thống chính là nguyên nhân gây ra các bệnh này. Do vậy, nghiên cứu phân lập vi khuẩn là định hướng chính đã được xác định cho nội dung tìm hiểu tác nhân gây ra bệnh đốm trắng nội tạng ở cá CVV tại Nha Trang, Khánh hòa. Ngoài ra, việc xác định các mẫu cá bệnh có bị nhiễm virus gây hoại tử thần kinh (VNN) hay không và phát hiện các loại ký sinh trùng cảm nhiễm ở cá bệnh cũng xác định phải được quan tâm.
3.3. Nghiên cứu tác nhân gây ra bệnh đốm trắng nội tạng của cá chim vây vàng nuôi tại Vũng ngán trên vịnh Nha Trang, Khánh Hòa.