B Sy LOD LOQ
0,0009 0,0065 0,46 (g/mL) 1,53(g/mL)
Kết luận: Khoảng tuyến tính của ibuprofen trong dung môi HCl 0,1M là 2 40 g/mL.
3.2.3.3. paracetamol
Tiến hành pha các dung dịch h n hợp paracetamol và ibuprofen trong HCl 0,1M theo tỷ lệ Cibuprofen/CParacetamol từ 1/1 đến 1/200, các thể tích Vparacetamol
và Vibuprofen được lấy như bảng 3.35 và định mức bằng dung dịch HCl 0,1M trong bình định mức 25 mL.
Trong bảng 3.35 thì:
Vibuprofen(1), Vibuprofen(2), Vibuprofen(3) là thể tích dung dịch ibuprofen tương ứng với các nồng độ: 25 µg/mL; 5 µg/mL; 0,5 µg/mL.
Vparacetamol là thể tích dung dịch paracetamol có nồng độ 25 µg/mL.
Bảng 3.35. Pha chế các dung dịch hỗn hợp paracetamol và ibuprofen
Mẫu Cibuprofen/
Cparacetamol Cibuprofen Cparacetamol
Vibuprofen (1) Vibuprofen (2) Vibuprofen (3) Vparacetamol 1 1/1 10,00 10,00 10,0 - - 10,0 2 1/10 1,00 10,00 - 5,0 - 10,0 3 1/20 0,50 10,00 - 2,5 - 10,0 4 1/40 0,25 10,00 - - 12,5 10,0 5 1/60 0,20 12,00 - - 10,0 12,0 6 1/80 0,15 12,00 - - 7,5 12,0 7 1/100 0,10 10,00 - - 5,0 10,0 8 1/200 0,05 10,00 - - 2,5 10,0
Thực hiện phép đo độ hấp thụ quang của các h n hợp trong khoảng bước sóng 210285 nm; cứ 0,5 nm lấy 1 giá trị. Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng paracetamol và ibuprofen theo chương trình lọc Kalman [23]. Kết quả xác định hàm lượng paracetamol và ibuprofen được trình bày ở bảng 3.36.
Bảng 3.36. Kết quả tính nồng độ, sai số của paracetamol và ibuprofen trong hỗn hợp
Mẫu Cibuprofen/
Cparacetamol C0ibuprofen C0paracetamol Cibuprofen Cparacetamol RE% CIbuprofen RE% Cparacetamol 1 1/1 10,00 10,00 9,95 10,02 -0,5 0,2 2 1/10 1,00 10,00 0,98 9,96 -2,0 -0,4 3 1/20 0,50 10,00 0,52 10,05 4,0 0,5 4 1/40 0,25 10,00 0,262 9,94 4,8 -0,6 5 1/60 0,20 12,00 0,219 11,91 9,5 -0,7 6 1/80 0,15 12,00 0,167 12,1 11,3 0,8 7 1/100 0,10 10,00 0,115 9,92 15,0 -0,8 8 1/200 0,05 10,00 0,059 9,91 18,0 -0,9
Trong bảng 3.36 thì:
C0ibuprofen và C0paracetamol (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen tự
pha trong các h n hợp.
Cibuprofen và Cparacetamol (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen xác định được theo phương pháp lọc Kalman [23].
RE% Cibuprofen và RE% Cparacetamol là sai số phép xác định hàm lượng paracetamol và ibuprofen.
Nhận xét: Kết quả thu được ở bảng 3.36 cho thấy khi hàm lượng
paracetamol lớn hơn ibuprofen trên 60 lần (mẫu 5) thì phương pháp lọc Kalman mắc sai số lớn (lớn hơn 10%) đối với cấu tử ibuprofen có nồng độ nhỏ trong khi cấu tử paracetamol có nồng độ lớn mắc sai số nhỏ (cao nhất là 0,9%). Trong khoảng tỉ lệ nồng độ C P M P R C C 1 1 4 0 C 1 thì các kết quả xác định có sai số nhỏ (dưới 5% với cấu tử có nồng độ nhỏ là ibuprofen và dưới 1% với cấu tử có nồng độ lớn là paracetamol )
3.2.4. Xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen trong thuốc Ibucapvic
Xử lý mẫu thuốc: Cân 10 viên thuốc, tính khối lượng trung bình của 1 viên, đem nghiền nhỏ thành bột mịn, rồi lấy chính xác lượng bột tương đương chứa 32,5 mg paracetamol , 20,0 mg ibuprofen cho vào bình định mức 100 mL, thêm dung dịch HCl 0,1 M, lắc kỹ cho tan hoàn toàn, định mức đến vạch, ta được 100 mL, đem lọc, bỏ khoảng 20 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc pha loãng thành 50 mL ta được dung dịch chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 65 g/mL, ibuprofen là 40 g/mL. Tiếp tục pha loãng
đến khi dung dịch thuốc có hàm lượng paracetamol là 13 g/mL, ibuprofen là 8 g/mL.
Bảng 3.37. Kết quả tính hàm lƣợng và sai số paracetamol và ibuprofen trƣớc khi thêm chuẩn
Mẫu C0paracetamol C0ibuprofen Cparacetamol Cibuprofen RE% Cparacetamol RE% Cibuprofen 1 1,300 0,800 1,293 0,813 -0,538 1,625 2 2,600 1,600 2,587 1,621 -0,500 1,312 3 5,200 3,200 5,181 3,236 -0,365 1,125 4 6,500 4,000 6,476 4,039 -0,369 0,975 5 13,000 8,000 12,978 8,061 -0,169 0,762
Nhận xét: Kết quả thu được ở bảng 3.37. cho thấy khi nồng độ nhỏ
thì sai số lớn. Trong mẫu thuốc có tỷ lệ nồng độ các chất paracetamol:ibuprofen là 325:200 nên ta dễ dàng xác định được nồng độ chính xác của paracetamol và ibuprofen vì có hàm lượng lớn.
Pha các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen có Cparacetamol = 25 μg/mL, Cibuprofen = 25 μg/mL. Sau đó, lấy 12,5 mL dung dịch thuốc Ibucapvic cho vào 9 bình định mức 25 mL, đánh số thứ tự rồi tiến hành thêm lần lượt thể tích các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen như bảng 3.38, sau đó định mức bằng dung dịch HCl 0,1M.
Bảng 3.38. Thành phần các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào dung dịch mẫu Ibucapvic
Mẫu Vthuốc (mL) Vparacetamol (mL) Vibuprofen (mL) 1 12,5 0 0 2 12,5 0,5 3 12,5 1,0 4 12,5 1,5 5 12,5 2,0 6 12,5 0,5 7 12,5 1,0 8 12,5 1,5 9 12,5 2,0
Trong đó:
Vthuốc là thể tích mẫu thuốc Ibucapvic có chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 13 g/mL, ibuprofen là 8 g/mL.
Vparacetamol là thể tích paracetamol có nồng độ tương ứng là Cparacetamol = 25 μg/mL thêm vào dung dịch mẫu.
Vibuprofen là thể tích ibuprofen có nồng độ tương ứng là Cibuprofen = 25 μg/mL thêm vào dung dịch mẫu.
Đem quét phổ ở bước sóng từ 210-285nm và dùng kết quả đo độ hấp thụ quang để tính tốn xác định hàm lượng paracetamol và ibuprofen qua đó tính độ thu hồi của chúng.
Bảng 3.39. Kết quả xác định độ thu hồi paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Ibucapvic
Mẫu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C0paracetamol 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 C0ibuprofen 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 [Paracetamol] 0 0,5 1,0 1,5 2,0 0 0 0 0 [Ibuprofen] 0 0 0 0 0 0,5 1,0 1,5 2,0 Cparacetamol 6,57 7,09 7,55 8,07 8,53 Cibuprofen 3,97 4,57 5,09 5,41 5,96 Rev% Cparacetamol 100,30 99,70 100,91 99,39 - - - - Rev% Cibuprofen - - - - 102,52 103,02 98,49 99,75 Trong đó:
c0paracetamol, C0ibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen
trong thuốc Ibucapvic trước khi thêm chuẩn.
[Paracetamol], [Ibuprofen] là lượng chất chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào mẫu pha chế.
Cparacetamol, Cibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen xác định được sau khi thêm chuẩn.
Rev(%) Cparacetamol, Rev(%) Cibuprofen là độ thu hồi của paracetamol và ibuprofen.
Nhận xét: Qua bảng số liệu trên cho thấy độ thu hồi của paracetamol là
từ 99,39% đến 100,91%, độ thu hồi của ibuprofen là từ 98,49% đến 103,02%. Chứng tỏ dùng phương pháp thêm chuẩn để tính hàm lượng paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Ibucapvic có độ đúng tốt.
3.2.5. Xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen trong thuốc Dibulaxan
Xử lý mẫu thuốc: Cân 10 viên thuốc, tính khối lượng trung bình của 1 viên, đem nghiền nhỏ thành bột mịn, rồi lấy chính xác lượng bột tương đương chứa 32,5 mg paracetamol , 20,0 mg ibuprofen cho vào bình định mức 100 mL, thêm dung dịch HCl 0,1 M, lắc kỹ cho tan hoàn toàn, định mức đến vạch, ta được 100 mL, đem lọc, bỏ khoảng 20 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc pha loãng thành 50 mL ta được dung dịch chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 65 g/mL, ibuprofen là 40 g/mL. Tiếp tục pha loãng
đến khi dung dịch thuốc có hàm lượng paracetamol là 13 g/mL, ibuprofen là 8 g/mL.
Bảng 3.40. Kết quả tính hàm lƣợng và sai số paracetamol và ibuprofen trƣớc khi thêm chuẩn
Mẫu C0paracetamol C0ibuprofen Cparacetamol Cibuprofen RE% Cparacetamol RE% Cibuprofen 1 1,300 0,800 1,300 0,800 1,308 0,818 2 2,600 1,600 2,600 1,600 2,611 1,625 3 5,200 3,200 5,200 3,200 5,219 3,240 4 6,500 4,000 6,500 4,000 6,515 4,035 5 13,000 8,000 13,000 8,000 13,021 8,046
Nhận xét: Kết quả thu được ở bảng 3.40 cho thấy khi nồng độ nhỏ thì sai số lớn. Trong mẫu thuốc có tỷ lệ nồng độ các chất paracetamol:ibuprofen là 325:200 nên ta dễ dàng xác định được nồng độ chính xác của paracetamol và ibuprofen vì có hàm lượng lớn.
Pha các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen có Cparacetamol = 25 μg/mL, Cibuprofen = 25 μg/mL. Sau đó, lấy 12,5 mL dung dịch thuốc Dibulaxan cho vào 9 bình định mức 25 mL, đánh số thứ tự rồi tiến hành thêm lần lượt thể tích các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen như bảng 3.41, sau đó định mức bằng dung dịch HCl 0,1M.
Bảng 3.41. Thành phần các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào dung dịch mẫu Dibulaxan
Mẫu Vthuốc (mL) Vparacetamol (mL) Vibuprofen (mL) 1 12,5 0 0 2 12,5 0,5 3 12,5 1,0 4 12,5 1,5 5 12,5 2,0 6 12,5 0,5 7 12,5 1,0 8 12,5 1,5 9 12,5 2,0 Trong đó:
Vthuốc là thể tích mẫu thuốc Dibulaxan có chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 13 g/mL, ibuprofen là 8 g/mL.
Vparacetamol là thể tích paracetamol có nồng độ tương ứng là Cparacetamol =
Vibuprofen là thể tích ibuprofen có nồng độ tương ứng là Cibuprofen = 25 μg/mL thêm vào dung dịch mẫu.
Đem quét phổ ở bước sóng từ 210-285nm và dùng kết quả đo độ hấp thụ quang để tính tốn xác định hàm lượng paracetamol và ibuprofen qua đó tính độ thu hồi của chúng.
Bảng 3.42. Kết quả xác định độ thu hồi paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Dibulaxan.
Mẫu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C0paracetamol 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 C0ibuprofen 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 [Paracetamol] 0 0,5 1,0 1,5 2,0 0 0 0 0 [Ibuprofen] 0 0 0 0 0 0,5 1,0 1,5 2,0 Cparacetamol 6,63 7,28 7,52 8,24 8,47 Cibuprofen 4,16 4,55 5,12 5,79 6,22 Rev% Cparacetamol 102,26 98,34 101,66 97,59 Rev% Cibuprofen 97,36 99,04 103,13 101,44 Trong đó:
C0paracetamol, C0ibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen
trong thuốc Dibulaxan trước khi thêm chuẩn.
[Paracetamol], [Ibuprofen] là lượng chất chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào mẫu pha chế.
Cparacetamol, Cibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen xác định được sau khi thêm chuẩn.
Rev(%) Cparacetamol, Rev(%) Cibuprofen là độ thu hồi của paracetamol và ibuprofen
Nhận xét: Qua bảng số liệu trên cho thấy độ thu hồi của paracetamol là
Chứng tỏ dùng phương pháp thêm chuẩn để tính hàm lượng các chất paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Dibulaxan có độ đúng tốt.
3.2.6. Xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen trong thuốc Travicol
Xử lý mẫu thuốc: Cân 10 viên thuốc, tính khối lượng trung bình của 1 viên, đem nghiền nhỏ thành bột mịn, rồi lấy chính xác lượng bột tương đương chứa 50 mg Paracetamol, 20,0 mg ibuprofen cho vào bình định mức 100 mL, thêm dung dịch HCl 0,1 M, lắc kỹ cho tan hoàn toàn, định mức đến vạch, ta được 100 mL, đem lọc, bỏ khoảng 20 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc pha loãng thành 100 mL ta được dung dịch chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 50 g/mL, ibuprofen là 20 g/mL. Tiếp tục pha loãng
đến khi dung dịch thuốc có hàm lượng paracetamol là 25 g/mL, ibuprofen là 10 g/mL.
Bảng 3.43. Kết quả tính hàm lƣợng và sai số paracetamol và ibuprofen trƣớc khi thêm chuẩn
Mẫu C0paracetamol C0ibuprofen Cparacetamol Cibuprofen RE% Cparacetamol RE% Cibuprofen 1 2,000 0,800 2,031 0,783 1,550 -2,125 2 4,000 1,600 4,054 1,574 1,350 -1,625 3 6,000 2,400 6,061 2,371 1,017 -1,208 4 8,000 3,200 8,060 3,169 0,750 -0,969 5 10,000 4,000 10,055 3,975 0,550 -0,625
Nhận xét: Kết quả thu được ở bảng 3.43 cho thấy khi nồng độ nhỏ
thì sai số lớn. Trong mẫu thuốc có tỷ lệ nồng độ các chất paracetamol:ibuprofen là 500:200 nên ta dễ dàng xác định được nồng độ chính xác của paracetamol và ibuprofen vì có hàm lượng lớn.
Pha các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen có Cparacetamol = 25
Travicol cho vào 9 bình định mức 25 mL, đánh số thứ tự rồi tiến hành thêm lần lượt thể tích các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen như bảng 3.44, sau đó định mức bằng dung dịch HCl 0,1M.
Bảng 3.44. Thành phần các dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào dung dịch mẫu Travicol
Mẫu Vthuốc (mL) Vparacetamol
(mL) Vibuprofen (mL) 1 10 0 0 2 10 0,5 3 10 1,0 4 10 1,5 5 10 2,0 6 10 0,5 7 10 1,0 8 10 1,5 9 10 2,0 Trong đó:
Vthuốc là thể tích mẫu thuốc Travicol có chứa hàm lượng tương đương paracetamol là 25 g/mL, ibuprofen là 10 g/mL.
Vparacetamol là thể tích paracetamol có nồng độ tương ứng là Cparacetamol = 25 μg/mL thêm vào dung dịch mẫu.
Vibuprofen là thể tích ibuprofen có nồng độ tương ứng là Cibuprofen = 25 μg/mL thêm vào dung dịch mẫu.
Đem quét phổ ở bước sóng từ 210-285nm và dùng kết quả đo độ hấp thụ quang để tính tốn xác định hàm lượng paracetamol và ibuprofen qua đó tính độ thu hồi của chúng.
Bảng 3.45. Kết quả xác định độ thu hồi paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Travicol
Mẫu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C0paracetamol 10 10 10 10 10 10 10 10 10 C0ibuprofen 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 [Paracetamol] 0 0,5 1,0 1,5 2,0 0 0 0 0 [Ibuprofen] 0 0 0 0 0 0,5 1,0 1,5 2,0 Cparacetamol 10,14 10,41 11,29 11,48 12,45 Cibuprofen 4,08 4,63 4,98 5,54 6,19 Rev% Cparacetamol 97,73 101,48 98,42 103,06 Rev% Cibuprofen 101,23 97,55 99,02 102,70 Trong đó:
C0paracetamol, C0ibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen trong thuốc Travicol trước khi thêm chuẩn.
[Paracetamol], [Ibuprofen] là lượng chất chuẩn paracetamol và ibuprofen thêm vào mẫu pha chế.
Cparacetamol, Cibuprofen (μg/mL) là hàm lượng paracetamol và ibuprofen xác định được sau khi thêm chuẩn.
Rev(%) Cparacetamol, Rev(%) Cibuprofen là độ thu hồi của paracetamol và ibuprofen
Nhận xét: Qua bảng số liệu trên cho thấy độ thu hồi của paracetamol
là từ 97,73% đến 103,06%, độ thu hồi của ibuprofen là từ 97,55% đến 102,70% . Chứng tỏ dùng phương pháp thêm chuẩn để tính hàm lượng các chất paracetamol, ibuprofen trong mẫu thuốc Travicol có độ đúng tốt.
KẾT LUẬN
Đã khảo sát và chọn được các thơng số tối ưu cho q trình phân tích sắc ký như:
- Cột tách: cột C18.
- Detector PDA bước sóng chọn lọc đối với từng chất paracetamol là 247.1nm và ibuprofen là 218,7nm
- Tốc độ dòng chảy: 0,6 mL/phút. - Nhiệt độ phân tích: 400C.
- Pha động: kênh A: dung dịch đệm photphat (pH=3) + kênh B: dung dịch axetonitril tỉ lệ 90:10 về thể tích.
- Dung mơi pha mẫu: h n hợp dung dịch đệm đệm photphat (pH=3) và dung dịch axetonitril tỉ lệ 90:10 về thể tích.
Đã xây dựng được đường chuẩn đối với paracetamol và ibuprofen với khoảng tuyến tính của paracetamol từ 100 đến 500 (ppm)và của ibuprofen là từ 500 đến 1000(ppm). Với phương trình đường chuẩn của paracetamol là
y = 19987x-96916; ibuprofen là y = 45188x + 178501.
Đã xây dựng được đường thêm chuẩn trên nền các mẫu thực
Đã xác định được đồng thời paracetamol và ibuprofen trong các mẫu thuốc Ibucapvic, Dibuprofenlaxan và Travicol với độ lệch chuẩn tương đối %RSD của phép xác định paracetamol từ 0,216% đến 0,256%; độ lệch chuẩn tương đối %RSD của phép xác định ibuprofen từ 0,251% đến 0,637%; Độ thu hồi của phép xác định paracetamol trong các mẫu thuốc Ibucapvic, Dibuprofenlaxan và Travicol từ 96,00% đến 98,75%; độ thu hồi của của phép xác định ibuprofen trong các mẫu thuốc Ibucapvic, Dibuprofenlaxan và Travicol từ 96,00% đến 99,00%.
Từ các kết quả thu được cho thấy, phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng các điều kiện tiến hành phân tích như trên đã đạt được yêu cầu về độ đúng và có đủ tin cậy để phân tích mẫu thực tế.
Khoảng bước sóng thích hợp để qt phổ từ 210-300 nm, paracetamol λmax = 244 nm, ibuprofen λmax = 220 nm trong môi trường axit HCl 0,1M.
- Khảo sát, xác định khoảng tuyến tính độ hấp thụ quang của paracetamol là 0,2 đến 30,0 μg/mL, ibuprofen là từ 1,0 đến 40,0 μg/mL.
Đã xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen trong h n hợp cho thấy có thể xác định được paracetamol và ibuprofen trong h n hợp tương đối chính xác.
Sử dụng phương pháp thêm chuẩn xác định paracetamol và ibuprofen trong mẫu thuốc Ibucapvic, Dibulaxan, Travicol với độ thu hồi lần lượt của paracetamol từ 99,39% đến 100,91%; 97,59% đến 102,26%; 97,73% đến 103,06%; của ibuprofen là từ 98,49% đến 103,02%; 97,36% đến 103,13%; 97,55% đến 102,70%.
Kết quả xác định paracetamol và ibuprofen trong thuốc Ibucapvic, Dibulaxan, Travicol theo phương pháp HPLC và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử sử dụng chương trình lọc Kalman là tương đương.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt
1. Dương Thị Tú Anh (2014) "Các phương pháp phân tích cơng cụ", Nhà
xuất bản giáo dục Việt Nam.