Dibulaxan và Travicol theo phƣơng pháp thêm chuẩn
3.1.11.1 Xác định paracetamol và ibuprofen trong thuốc Ibucapvic bằng phương pháp thêm chuẩn
Cân chính xác thuốc Ibucapvic (0,0195 gam) ứng với 8,125mg paracetamol, 5mg ibuprofen cho vào ống nhựa ly tâm (50 mL) được đánh số thứ tự. Hút chính xác lần lượt 5 mL paracetamol và ibuprofen chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 22, 23 thêm vào các ống tương ứng, sau đó thêm dung môi pha mẫu để tổng thể tích 25mL. Lắc đều, rung siêu âm, ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45μm.
Bảng 3.21. Bảng thêm chuẩn paracetamol trong thuốc Ibucapvic
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng thuốc (g) 0,0195 0,0195 0,0195 0,0195 0,0195 Thể tích paracetamol thêm vào
(mL) - 5,0 5,0 7,7 10,0
Nồng độ paracetamol thêm vào
(ppm) - 500 1000 1000 1000
Thể tích dung môi pha mẫu
(mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 20,0
Nồng độ paracetamol sau khi
Bảng 3.22. Bảng thêm chuẩn Ibuprofen trong thuốc Ibucapvic
Mẫu 1 6 7 8 9
Khối lượng thuốc (g) 0,0195 0,0195 0,0195 0,0195 0,0195 Thể tích Ibuprofen thêm vào (mL) - 5,0 5,0 7,5 10,0 Nồng độ Ibuprofen thêm vào (ppm) - 500 1000 1000 1000 Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 20,0 15,0 Nồng độ Ibuprofen sau khi pha (ppm) 200 300 400 500 600 Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 25.
Bảng 3.23. Kết quả phân tích thuốc Ibucapvic theo phƣơng pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của chất trƣớc khi thêm chuẩn
theo lí thuyết (ppm) Nồng độ của chất thêm vào mẫu (ppm) Nồng độ của chất xác định đƣợc sau khi thêm chuẩn theo thực
nghiệm (ppm) ReV (%) Paraceta mol Ibuprofen Paracet amol Ibuprof en Paracetam ol Ibuprofe n 1 325 200 - - 329 205 - 2 325 200 100 - 426 - 97, 00 3 325 200 200 - 522 - 96,50 4 325 200 300 - 624 - 98,30 5 325 200 400 - 720 - 97,75 6 325 200 - 100 - 301 96,00 7 325 200 - 200 - 402 98,50 8 325 200 - 300 - 501 98,60 9 325 200 - 400 - 600 98,75
Nhận xét: Kết quả phân tích ở bàng 3.23 cho thấy hàm lượng do nhà sản xuất công bố và hàm lượng parracentamol và ibuprofen xác định được khác nhau không đáng kể. Kết quả trên cho thấy thu hồi của paracetamol là từ 96,5% đến 98,3% và của ibuprofen là từ 96,00% đến 98,75%. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích thuốc Ibucapvic trong thực tế.
3.1.11.2. Xác định paracetamol và ibuprofen trong thuốc Dibulaxan bằng phương pháp thêm chuẩn
Cân chính xác thuốc Dibulaxan (0,0210 gam) ứng với 8,125 mg paracetamol, 5 mg ibuprofen cho vào ống nhựa ly tâm (50 mL) được đánh số thứ tự. Hút chính xác lần lượt 5 mL paracetamol và ibuprofen chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 26, 27 thêm vào các ống tương ứng, sau đó thêm dung môi pha mẫu để tổng thể tích 25mL. Lắc đều, rung siêu âm, ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45μm.
Bảng 3.24. Bảng thêm chuẩn paracetamol trong thuốc Dibulaxan
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng thuốc (g) 0,0210 0,0210 0,0210 0,0210 0,0210 Thể tích paracetamol thêm vào (mL) - 5,0 5,0 7,5 10,0
Nồng độ paracetamol thêm vào
(ppm) - 500 1000 1000 1000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 17,5 15,0 Nồng độ paracetamol sau khi pha
(ppm) 325 425 525 625 725
Bảng 3.25. Bảng thêm chuẩn Ibuprofen trong thuốc Dibulaxan
Mẫu 1 6 7 8 9
Khối lượng thuốc (g) 0,0210 0,0210 0,0210 0,0210 0,0210 Thể tích Ibuprofen thêm vào (mL) - 5,0 5,0 7,5 10,0
Nồng độ Ibuprofen thêm vào
(ppm) - 500 1000 1000 1000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 17,5 15,0 Nồng độ Ibuprofen sau khi pha
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 3.25
Bảng 3.26. Kết quả phân tích thuốc Dibulaxan theo phƣơng pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của chất trƣớc khi thêm chuẩn
theo lí thuyết (ppm)
Nồng độ của chất thêm vào mẫu (ppm)
Nồng độ của chất xác định đƣợc sau
khi thêm chuẩn theo thực nghiệm
(ppm)
ReV (%)
Paracetamol Ibuprofen Paracetamol Ibuprofen Paracetamol Ibuprofen
1 325 200 - 328 203 2 325 200 100 426 98,00 3 325 200 200 521 96,50 4 325 200 300 624 98,60 5 325 200 400 723 98,75 6 325 200 100 - 300 97,00 7 325 200 200 - 401 99,00 8 325 200 300 - 496 97,60 9 325 200 400 - 592 97,25
Nhận xét: Kết quả phân tích ở bàng 3.26 cho thấy hàm lượng do nhà
sản xuất công bố và hàm lượng parracentamol và ibuprofen xác định được khác nhau không đáng kể. Kết quả trên cho thấy thu hồi của paracetamol là từ 96,50% đến 98,75% và của ibuprofen là từ 97,00% đến 99,00%. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích thuốc Dibulaxan trong thực tế.
3.1.11.3. Xác định paracetamol và ibuprofen trong thuốc Travicol bằng phương pháp thêm chuẩn
Cân chính xác thuốc Travicol (0,0182 gam) ứng với 12,5mg paracetamol, 5mg ibuprofen cho vào ống nhựa ly tâm (50 mL) được đánh số
thứ tự. Hút chính xác lần lượt 5 mL paracetamol và ibuprofen chuẩn với các nồng độ gốc như bảng 29,30 thêm vào các ống tương ứng, sau đó thêm dung môi pha mẫu để tổng thể tích 25mL. Lắc đều, rung siêu âm, ly tâm gạn lấy dung dịch đem lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước 0,45μm.
Bảng 3.27. Bảng thêm chuẩn paracetamol trong thuốc Travicol
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng thuốc (g) 0,0182 0,0182 0,0182 0,0182 0,0182 Thể tích paracetamol thêm vào
(mL) - 5,0 5,0 7,5 10,0
Nồng độ paracetamol thêm vào
(ppm) - 500 1000 1000 1000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 17,5 15,0 Nồng độ paracetamol sau khi pha
(ppm) 500 600 700 800 900
Bảng 3.28. Bảng thêm chuẩn Ibuprofen trong thuốc Travicol
Mẫu 1 6 7 8 9
Khối lượng thuốc (g) 0,0182 0,0182 0,0182 0,0182 0,0182 Thể tích Ibuprofen thêm vào (mL) - 5,0 5,0 7,5 10,0
Nồng độ Ibuprofen thêm vào
(ppm) - 500 1000 1000 1000
Thể tích dung môi pha mẫu (mL) 25,0 20,0 20,0 17,5 15,0 Nồng độ Ibuprofen sau khi pha
(ppm) 200 300 400 500 600
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt từng dung dịch theo điều kiện sắc ký đã chọn ở trên thu được kết quả như bảng 3.29
Bảng 3.29. Kết quả phân tích thuốc Travicol theo phương pháp thêm chuẩn
STT
Nồng độ của chất trƣớc khi thêm chuẩn theo lí
thuyết (ppm)
Nồng độ của chất thêm vào mẫu
(ppm)
Nồng độ của chất xác định đƣợc sau khi thêm chuẩn theo thực
nghiệm (ppm)
ReV (%)
Paracetamol Ibuprofen Paracetamol Ibuprofen Paracetamol Ibuprofen
1 500 200 - 518 204 - 2 500 200 100 613 95,00 3 500 200 200 710 96,00 4 500 200 300 814 98,60 5 500 200 400 910 98,00 6 500 200 100 - 302 98,00 7 500 200 200 - 401 98,50 8 500 200 300 - 496 97,30 9 500 200 400 - 598 98,50
Nhận xét: Kết quả phân tích ở bàng 3,29 cho thấy hàm lượng do nhà
sản xuất công bố và hàm lượng parracentamol và ibuprofen xác định được khác nhau không đáng kể. Kết quả trên cho thấy thu hồi của paracetamol là từ 96,00% đến 98,60% và của ibuprofen là từ 97,30% đến 98,50%. Điều đó chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có đủ tin cậy để phân tích thuốc Travicol trong thực tế.
3.2. Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử
3.2.1. Khảo sát phổ hấp thụ phân tử của paracetamol và ibuprofen.
xác định được paracetamol và ibuprofen bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử thì paracetamol và ibuprofen phải hấp thụ quang trong khoảng bước sóng khảo sát. Do đó tôi tiến hành khảo sát phổ hấp thụ phân tử trong khoảng bước sóng từ 200 nm đến 900 nm của các dung dịch paracetamol và ibuprofen có nồng độ lần lượt là 8 µg/mL và 10 µg/mL.
Hình 3.17. Phổ hấp thụ quang của các dung dịch chuẩn Paracentamol (1) và ibuprofen (2).
Kết quả phổ hấp thụ quang phân tử của paracetamol và ibuprofen ở bước sóng từ 210 - 285 nm được thể hiện ở hình 3.17
Nhận xét: Từ kết quả thu được cho thấy paracetamol có độ hấp thụ
quang cực đại tại λ = 244 nm, ibuprofen có độ hấp thụ quang cực đại tại λ = 220 nm. Phổ hấp thụ quang của paracetamol và ibuprofen xen phủ nhau gần như hoàn toàn, do đó gây khó khăn cho việc xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen trong h n hợp. Trên cơ sở khảo sát trong khoảng bước sóng 285 - 900 nm nhận thấy paracetamol và ibuprofen gần như không hấp thụ ánh sáng. Mặt khác ở 200 – 210 nm thì độ hấp thụ quang của 2 chất lại rất lớn và không ổn định. Vì vậy tôi lựa chọn khoảng bước sóng từ 210 - 285 nm để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.
Dựa trên các tài liệu tham khảo tôi có khảo sát và kiểm tra lại từ đó đưa ra điều kiện tối ưu cho phép đo quang là: môi trường HCl 0,1M; thời gian đo quang sau khi pha là 30 phút và ở nhiệt độ phòng (25350C), khoảng bước sóng đo quang là 210285 nm.
3.2.2. Kiểm tra tính cộng tính độ hấp thụ quang của dung dịch hỗn hợp paracetamol và ibuprofen.
Phương pháp trắc quang xác định đồng thời các cấu tử trong một h n hợp mà phổ hấp thụ quang phân tử của chúng xen phủ nhau thì độ hấp thụ quang của các cấu tử trong h n hợp phải có tính cộng tính.
Để áp dụng phương pháp trắc quang dùng phổ toàn phần thì độ hấp thụ quang của các chất trong h n hợp phải tuân theo định luật cộng tính, do đó cần kiểm tra tính cộng tính độ hấp thụ quang của dung dịch h n hợp paracetamol và ibuprofen trong khoảng bước sóng tối ưu đã lựa chọn là từ 210 - 285nm.
Tiến hành pha dung dịch paracetamol chuẩn có nồng độ 8µg/mL, dung dịch ibuprofen nồng độ 10 µg/mL và h n hợp của chúng trong HCl 0,1M sau đó đo độ hấp thụ quang của các dung dịch ở bước sóng từ 210 - 285nm. Cứ 0,5nm ghi 1 giá trị. Cộng phổ riêng phần của 2 dung dịch chuẩn paracetamol và ibuprofen rồi so sánh với phổ h n hợp của 2 dung dịch. Đánh giá sự cộng tính độ hấp thụ quang thông qua tính sai số tương đối và sai số tuyệt đối. Kết quả kiểm tra sự cộng tính độ hấp thụ quang được trình bày ở bảng 3.30.
Bảng 3.30. Độ hấp thụ quang của paracetamol và ibuprofen và hỗn hợp ở một số bƣớc sóng λ (nm) Aparacetamol AIbuprofen ALT ATN Sai số Sai số tuyệt đối tƣơng đối (%) 210 0,378 0,430 0,808 0,818 -0,010 -1,238 215 0,241 0,418 0,659 0,663 -0,004 -0,607 220 0,248 0,429 0,677 0,683 -0,006 -0,886 225 0,332 0,342 0,674 0,681 -0,007 -1,039 230 0,343 0,217 0,560 0,556 0,004 0,714 235 0,401 0,111 0,512 0,510 0,002 0,391 240 0,443 0,052 0,495 0,482 0,013 2,626 245 0,456 0,037 0,493 0,479 0,014 2,840 250 0,419 0,035 0,454 0,443 0,011 2,423 255 0,334 0,036 0,370 0,379 -0,009 -2,432 260 0,242 0,037 0,279 0,285 -0,006 -2,151 265 0,169 0,037 0,206 0,202 0,004 1,942 270 0,150 0,030 0,180 0,185 -0,005 -2,778 275 0,072 0,024 0,096 0,097 -0,001 -1,042 280 0,064 0,022 0,086 0,088 -0,002 -2,326 285 0,066 0,019 0,085 0,086 -0,001 -1,176
Nhận xét: Số liệu bảng 3.30 cho thấy, trong khoảng bước sóng 210 - 285
nm sai số cộng tính độ hấp thụ quang của h n hợp paracetamol và ibuprofen mắc phải không lớn. Sai số tuyệt đối có giá trị từ - 0,01 đến 0,014 còn sai số tương đối có giá trị từ - 2,778 đến 2,840 (< 3%). Như vậy, có thể xem như phổ của dung dịch paracetamol và ibuprofen có tính chất cộng tính trên toàn phổ, từ đó cho phép xác định đồng thời paracetamol và ibuprofen bằng phương pháp trắc quang.
3.2.3. Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bouguer – Lambert – Beer của paracetamol và ibuprofen và xác định LOD và LOQ
3.2.3.1. Khảo sát khoảng tuyến tính của paracetamol
Pha 1 dãy dung dịch paracetamol có nồng độ tăng dần từ 0,250µg/mL trong HCl 0,1M. Tiến hành đo độ hấp thụ quang của các dung dịch ở bước
sóng tối ưu của paracetamol là 244nm. Kết quả thu được ở bảng 3.31là giá trị trung bình của 3 lần đo.
Bảng 3.31. Độ hấp thụ quang của dung dịch paracetamol ở các giá trị nồng độ
Cparacetamol (g/mL) 0,2 0,5 1,0 2,0 5,0 8,0 A( 244 nm) 0,005 0,018 0,057 0,121 0,306 0,465 Cparacetamol (g/ml) 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 A ( 244 nm) 0,624 1,214 1,841 2,486 3,092
Từ kết quả đo quang ở bảng 3.31. Tiến hành xây dựng đường biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A vào nồng độ paracetamol. Kết quả được thể hiện ở hình 3.18.
Hình 3.18. Đƣờng hồi quy tuyến tính biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A vào nồng độ paracetamol
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 3.31 và hình 3.18 cho thấy, khi nồng độ
paracetamol < 30µg/mL thì độ hấp thụ quang phụ thuộc tuyến tính với nồng độ. Quá trình khảo sát cho thấy, khi nồng độ paracetamol từ 3050µg/mL thì
độ hấp thụ quang vẫn phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ. Tuy nhiên độ hấp thụ quang là rất lớn (A>2) khi đó sai số đo quang là lớn. Vì vậy, chỉ khảo sát độ hấp thụ quang của paracetamol khi nó tuân theo định luật Bouguer – Lambert – Beer trong khoảng nồng độ 0,230 µg/mL.
Từ kết quả thực nghiệm ở bảng 3.31 và hình 3.18 ta thấy, trong khoảng nồng độ paracetamol 0,230µg/mL độ hấp thụ quang phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ với R=0,9997. Kết quả tính LOD và LOQ của paracetamol được trình bày ở bảng 3.32.
Bảng 3.32. Kết quả xác định LOD và LOQ của paracetamol
B Sy LOD LOQ
-0,0071 0,011 0,537(g/mL) 1,789(g/mL)
Nhận xét: Khoảng tuyến tính của paracetamol trong môi trường HCl
0,1M là 1,830µg/mL
3.2.3.2. Khảo sát khoảng tuyến tính của ibuprofen
Pha 1 dãy dung dịch ibuprofen có nồng độ tăng từ 1,050µg/mL tiến hành đo độ hấp thụ quang của các dung dịch trong khoảng bước sóng tối ưu
= 220nm. Kết quả thu được ở bảng 3.33.
Bảng3.33. Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang của ibuprofen theo nồng độ
Cibuprofen (g/mL) 1,0 2 5,0 10,0 15,0 A( 220 nm) 0,041 0,079 0,21 0,429 0,644 Cibuprofen (g/mL) 20,0 25,0 30,0 40,0 A( 220 nm) 0,861 1,063 1,269 1,694
Từ kết quả đo quang ở bảng 3.33. Tiến hành xây dựng sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A vào nồng độ ibuprofen. Kết quả được thể hiện ở hình 3.19.
Hình 3.19. Đƣờng hồi quy tuyến tính biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A vào nồng độ ibuprofen
.Nhận xét: Qua hình 3.19 và bảng 3.33 ta thấy khi nồng độ ibuprofen nằm
trong khoảng 1 40g/mL thì độ hấp thụ quang phụ thuộc tuyến tính với nồng độ. Do vậy ta nên khảo sát ibuprofen trong khoảng nồng độ 1 40 g/mL.
Từ kết quả ở bảng 3.33 và hình 3.19 nhận thấy, trong khoảng nồng độ của ibuprofen từ 1 40 g/mL độ hấp thụ quang vẫn phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ với R= 0,9999. Kết quả tính LOD và LOQ của ibuprofen được trình bày ở bảng 3.34.
Bảng 3.34. Kết quả tính LOD và LOQ của ibuprofen
B Sy LOD LOQ
0,0009 0,0065 0,46 (g/mL) 1,53(g/mL)
Kết luận: Khoảng tuyến tính của ibuprofen trong dung môi HCl 0,1M là 2 40 g/mL.
3.2.3.3. paracetamol
Tiến hành pha các dung dịch h n hợp paracetamol và ibuprofen trong HCl 0,1M theo tỷ lệ Cibuprofen/CParacetamol từ 1/1 đến 1/200, các thể tích Vparacetamol và Vibuprofen được lấy như bảng 3.35 và định mức bằng dung dịch HCl 0,1M trong bình định mức 25 mL.
Trong bảng 3.35 thì:
Vibuprofen(1), Vibuprofen(2), Vibuprofen(3) là thể tích dung dịch ibuprofen tương ứng với các nồng độ: 25 µg/mL; 5 µg/mL; 0,5 µg/mL.
Vparacetamol là thể tích dung dịch paracetamol có nồng độ 25 µg/mL.
Bảng 3.35. Pha chế các dung dịch hỗn hợp paracetamol và ibuprofen
Mẫu Cibuprofen/
Cparacetamol Cibuprofen Cparacetamol
Vibuprofen (1) Vibuprofen (2) Vibuprofen (3) Vparacetamol 1 1/1 10,00 10,00 10,0 - - 10,0 2 1/10 1,00 10,00 - 5,0 - 10,0 3 1/20 0,50 10,00 - 2,5 - 10,0 4 1/40 0,25 10,00 - - 12,5 10,0 5 1/60 0,20 12,00 - - 10,0 12,0 6 1/80 0,15 12,00 - - 7,5 12,0 7 1/100 0,10 10,00 - - 5,0 10,0