- Bản mỏng silica gel pha thường TLC, Bản mỏng Sorbfil
2.3.6. Xác định thành phần, hàm lượng axit béo trong lipid tổng
Phương pháp: Lipid tổng được đem metyl hóa tiến hành theo phương pháp của Christie W. (1978) để xác định thành phần axit béo. Lipid được chuyển hóa sang dạng methyl ester bằng tác nhân H2S04/MeOH2% ở 80°C trong vòng 2h, hỗn hợp methyl ester được phân tích trên máy sắc kí khí kết nối khối phổ (GC - MS) hãng Shimadzu GCMS QP5050A (Kyoto, Nhật Bản). Khí mang He với tốc độ khí là 30cm/s, được đo tại Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên.
Thực nghiệm: Lấy 10mg mẫu lipid cần phân tích thành phần axit béo vào lọ thủy tinh 4 ml đem đi thổi khí, bổ sung 2 ml H2SO4/MeOH 3%, lắc đều, để ở nhiệt độ 80°C trong vòng 2h. Để nguội tới nhiệt độ phòng, bổ sung thêm 1 ml n - Hexan (phân tích) và 0,3 ml H2O vào lọ mẫu đã thực hiện methyl hóa, lắc đều, để phân lớp. Hút lớp phía trên vào lọ 4 ml (không hút kiệt). Tiếp tục bổ sung 1 ml n- Hexan vào, lắc đều. Quá trình phân lớp lại xảy ra, loại bỏ phần dịch phía dưới, lấy phần dịch phía trên, làm khan bằng Na2SO4, lọc bỏ muối và đuổi dung môi bằng khí Ar. Hỗn hợp thu được hòa tan trong CHCl3 (hoặc n-hexane), tinh sạch hỗn hợp methyl ester của axit béo trên bản mỏng điều chế với hệ dung môi n-hexane: diethyl ether (95:5, v:v). Cắt rìa bản mỏng, phun thuốc thử H2SO4/ MeOH 5% để phát hiện vệt chất,
ghép lại bản mỏng như cũ để phát hiện vùng chất, cạo phần silica gel có chất, rửa hấp phụ bằng dung môi CHCl3, đuổi dung môi bằng khí hoặc cô quay loại bỏ dung môi. Hỗn hợp methyl ester của axit béo được hòa tan trong n-hexane và phân tích trên máy sắc ký khí kết nối khối phổ GC-MS, sử dụng thư viện phổ chuẩn NIST để so sánh.