- Các chủng nấm mốc đã phân lập được
- Chủng nấm mốc 45a trong bộ sưu tập giống của Viện Công nghiệp Thực phẩm.
- Chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae Y7028 trong bộ sưu tập giống của Viện Cơng nghiệp Thực phẩm.
2.1.3 Hóa chất
Mơi trường phân lập và làm sạch
- Môi trường Czapeck cơ bản không Cacbon (1lit): (NH4)2SO4 0.2% K2HPO4 0.1%
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
28
MgSO4.7H2O 0.05% FeSO4.7H2O 0.001%
- Môi trường Mandel x1 (1lit)
(NH4)2SO4 2g Ure 0.5g KH2PO4 0.5g CaCl2 0.45g MgSO4.7H2O 0.5g CoCl2 0.05g
- Môi trường PDA : 300g khoai tây gọt vỏ, thái chỉ, rửa sạch, thêm 1.4lit nước ninh trong 2 giờ. Thu lấy 1lit dịch, thêm 20g glucose, 20g agar, khuấy đều, đun sôi trong 5 phút, chia vào các ống nghiệm, hấp thanh trùng 121°C/20 phút. Để nghiêng môi trường, chờ nguội rồi bảo quản trong tủ 4°C.
- Môi trường YM (1lit)
Yeast Extract 3g Malt Extract 3g Pepton 5g Glucose 10g
Hóa chất chung dùng cho phân tích
- Dung dịch Somogyi I Thành phần cho 1 lit
Na2CO3 24 NaHCO3 16g
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
29
K-tartrate 12g
CuSO4 4g
Na2SO4 180g Cách pha:
• Dung dịch A: hịa tan Na2CO3, NaHCO3, K-tartrate và 144g Na2SO4 trong nước, và nâng thể tích lên 800ml
• Dung dịch B: hịa tan CuSO4 và 36g Na2SO4 trong nước, nâng thể tích
lên 200ml
Trước khi sử dụng,trộn dung dịch A và B với tỉ lệ 4A:1B - Dung dịch Somogy II Thành phần cho 1lit: (NH4)6Mo7O24.4H2O 50g Dung dịch H2SO4 đặc (96%) 42ml Na2HAsO4.7H2O 6g Cách pha:
• Hịa tan (NH4)6Mo7O24.4H2O trong 900 ml nước, bổ xung 42 ml
H2SO4 đặc
• Hịa tan Na2HAsO4.7H2O trong 50 ml nước cất
Trộn 2 phần với nhau, nâng thể tích lên tới 1lit, giữ 48 tiếng ở 37ºC trong bình tối màu, sau đó mới được dùng.
- Dung dịch Na-acetate 0,1M - Dung dịch D-Glucose phân tích - H2SO4 0.75%
- NaOH 1.5% - Tween 80 - Nước cất
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
30
Hóa chất dùng cho PCR
- Enzyme Taq DNA Polymerase 5U/μl (Qiagen)
- dNTPs gồm: ATP, TTP, GTP, CTP (Pharmacia – Biotech) - Thang ADN mẫu dùng trong điện di gen
- Agarose dùng trong điện di gen (Pharmacia – Biotech)
- Ethidium bromide dùng để nhuộm gen (Pharmacia – Biotech) - Đệm TBE (Tris Borate EDTA) (Pharmacia – Biotech)
Hóa chất chạy điện di
♦ Acrylamide/Bis solution:
50ml = 14,6g Acrylamide + 0,4g N’N’- bis-methylene-acrylamide + nước cất Bảo quản ở 40C.
♦ 1,5M Tris-HCl, pH=8,8:
100ml = 18,15g Tris-base + 50ml nước cất, chỉnh pH lên 8,8 bằng HCl, sau đó định mứcthành 100ml. Bảo quản ở 40C.
♦ 1M Tris-HCl, pH =6,8
100ml = 12g Tris base + 60ml nước cất, chỉnh pH lên 6,8 bằng HCl, sau đó định mức thành 100ml.
♦ SDS solution
20ml = 2g + nước cất. Bảo quản ở nhiệt độ thường ♦ Dung dịch điện giải
500ml= 7,5g Tris base + 36g Glycine + 2,5g SDS + nước cất. Bảo quản ở nhiệt độ phòng.
♦ Dung dịch APS 30% (Amonium per sulphate) 1ml = 0,3g APS + nước cất. Bảo quản ở 40C.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
31
♦ Destain I
1000ml = 100ml axit acetic + 500ml methanol + 400ml nước cất. Bảo quản ở nhiệt độ phòng.
♦ Destain II
2000ml = 200ml axit acetic + 100ml methanol + 1700 ml nước cất. Bảo quản ở nhiệt độ phòng.
♦ Dung dịch nhuộm SDS- PAGE
100ml = 0,1g CBB (comasin brilliant blue) + Destain I ♦ Dung dịch congored 0,1%
200ml = 0,2g congo red + nước cất ♦ Dung dịch NaCl 1M: 1000ml ♦ Sample buffer Glycerol 2g SDS 0,4g Bromophenol blue 0,02g b-mercaptoethanol 0,5ml Tris-HCl pH 6,8 1ml Định mức lên 10ml bằng nước cất. ♦Pha đệm phosphat (PB) 1M * Dung dịch A:
Hoà tan 137,99: 2 = 68,995g NaH2PO4.1H2O trong 500ml nước cất * Dung dịch B:
Hoà tan 358: 2 = 179g Na2HPO4.12H2O trong 500ml nước cất
Đổ từ từ dung dịch A sang dung dịch B và dùng máy pH để đưa về pH=7,0 Trước khi dùng pha loãng thành 0.1M
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
32
♦ Soluble Xylan
5g xylan + 100ml H2O
dùng NaOH 1M điều chỉnh pH=10
khuấy 1h tại nhiệt độ phòng, li tâm trong ống Falcon 10000rpm/10 phút Lấy dịch trong phía trên điều chỉnh tới pH 7 bằng axít acetic 1M