8 1 FEC160, FEC161, FEC162 2 Nhà máy gi ấy Tân TiếnFEC163, FEC
3.6 PHÂN LOẠI BẰNG KỸ THUẬT FINGERPRINTING
Trong tổng số 164 chủng nấm mốc, chúng tơi phân thành 5 nhóm theo hoạt lực enzym. Dựa vào việc quan sát hình thái, màu sắc của bào tử nấm mốc và hoạt lực enzym để chọn ra 16 chủng, từ đó sử dụng kĩ thuật fingerprinting để phát hiện ra các chủng giống nhau trong 16 chủng lựa chọn.
Bảng 3.11 Danh sách 16 chủng fingerprinting
TT Kí hiệu D-d (mm) IU 1 FEC 130 25.3 34.513 2 FEC 94 25.5 30.969 3 FEC 74 25.0 30.428 4 FEC 110 22.8 28.493 5 FEC 114 25.7 26.815 6 FEC 98 24.0 25.451 7 FEC 57 23.3 22.856 8 FEC 53 23.1 19.742 9 FEC 93 25.6 19.403 10 FEC 105 25.0 19.017 11 FEC 95 26.6 18.988 12 FEC 156 22.9 16.803 13 FEC 147 19.4 7.828 14 FEC 128 21.1 7.157 15 FEC 158 21.9 6.150 16 FEC 102 17.0 5.408
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
66
Mồi được sử dụng trong kĩ thuật fingerprinting là MST1. Chu trình nhiệt được thiết lập là: biến tính ban đầu ở 95ºC trong 2 phút, kế tiếp là 35 vịng lặp (biến tính ở 94ºC trong 40 giây, gắn mồi ở 55ºC trong 40 giây, pha kéo dài ở 72ºC trong 2 phút), sau đó giữ ở 72ºC trong 10 phút, cuối cùng là duy trì ở 10ºC cho tới lúc lấy ra. Sau khi kết thúc phản ứng, sản phẩm được điện di trên gel agarose 1.5% trong dung dịch đệm là 0.5x TBE với hiệu điện thế 50-100V.
Hình 3.5 Phổ fingerprinting sử dụng mồi MST1
Kí hiệu: (1) FEC 53 ; (2) FEC 57; (3) FEC 74; (4) FEC 93; (5) FEC 94; (6) FEC 95; (7) FEC 98; (8) FEC 102; (9) FEC 105; (10) FEC 110; (11) FEC 114; (12) FEC 128; (13) FEC 130; (14) FEC 147; ( 15) FEC 156; (16) FEC 158.
Trước tiên có thể nhận thấy kết quả chạy điện di của sản phẩm PCR fingerprinting hiện lên rất rõ ràng, điều đó chứng tỏ phương pháp tiến hành là hợp lí. ADN nhân tốt, và kết quả trên là đáng tin cậy
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
67
Qua phổ PCR fingerprinting trên, có thể nhận thấy:
Phổ băng của giếng 2;3;5;10 hoàn toàn giống nhau. Phổ băng của các giếng cịn lại khác nhau hồn toàn chứng tỏ các chủng nấm mốc mà chúng tôi phân lập được là khác nhau và rấtđa dạng.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
68
3.7 ĐIỆN DI PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SDS-PAGE VÀ