Các chủng nấm mốcđược nuôi cấy trên môi trường Czapeck-Dox trong 3-5 ngày ở 30°C để thu nhận bào tử. Thêm 2ml dịch Tween 80 0.5% đã thanh trùng, vontex đều. Sau đó lấy 0.8ml dịch bào tử trong ống nghiệm chuyển vào bình tam giác 100 đã chứa 4.5ml môi trường YM thanh trùng. Ủ trong 6-16 giờ (nuôi lắc) để thu nhận mầm bào tử. Chuyển 1ml dịch bào tử trên vào ống eppendorf, ly tâm với tốc độ max trong 1 phút để thu sinh khối, bỏ nước phía trên và thêm 0.75ml SSC x2, lắc đều. Ủ ở 99°C (trong thermomixer) trong 20 phút. Chuyển toàn bộ dịch sang ống eppendorf mới, ly tâm, hút bỏ phần dịch và rửa tế bào một lần bằng nước cất vô trùng. Thêm 100 μl hạt thuỷ tinh, 100 μl dung dịch phenol/chloroform (tỉ lệ 1:1) và 100 μl nước cất vô trùng. Đặt vào máy phá tế bào phá trong 2 phút. Ly tâm 10 phút với tốc độ 10000 vòng/phút. Lấy phần dịch trong phía trên có chứa DNA làm khuôn cho phản ứng PCR. DNA sau khi tách chiết được giữ ở - 20ºC.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
39