Tiến hành ni cấy hai chủng giống điển hình Trichoderma (FEC 14)
và Aspergillus (FEC 4), độ lặp lại 3 lần theo hai phương pháp nuôi cấy rắn và lỏng, trên hai loại môi trường khác nhau: môi trường Czapeck và mơi trường Mandel (Thí nghiệm 1).
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
34
Bảng 2.1 Xây dựng môi trường và phương pháp nuôi cấy
Thí nghiệm 1
Ni lỏng, lắc 200rpm, 5 ngày Nuôi rắn, 5 ngày Czapeck x1 (50ml) Mandel x1 (50ml) Czapeck x1 (5ml) Mandel x1 (5ml) Bã mía (g) 0.15 0.15 1.5 1.5 Cám gạo (g) 0.35 0.35 3.5 3.5
Sau khi lựa chọn được mơi trường và phương pháp ni cấy thì ta tiến hành khảo sát tỉ lệ bã mía : cám gạo (Thí nghiệm 2)
Bảng 2.2 Xây dựng dải tỉ lệ bã mía : cám gạo
Thí nghiệm 2 Mơi trường đã lựa chọn (5ml)
Bã mía (g) 0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 Cám gạo (g) 4.5 3.5 2.5 1.5 0.5
Cách chiết enzyme khi nuôi cấy trên môi trường rắn :
- Bổ sung 75ml Na-acetate 0.1M pH=5 vào bình tam giác ni cấy - Lắc 200rpm/30ºC/1giờ, lấy 3ml dịch chiết cho vào 2 ống eppendorf,
ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút, thu lấy 1.5ml enzyme thô bảo quản trong tủ đá.
Cách thu enzyme khi nuôi cấy lỏng:
- Lấy 3ml dịch nuôi cấy cho vào 2 ống eppendorf, ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút, thu lấy 1.5ml enzyme thô bảo quản trong tủ đá.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Luận văn thạc sĩ khoa học Nguyễn Thu Hà
35