3.3.1. Điều tra phỏng vấn
Hỏi trực tiếp chủ trại về tình hình lợn nái bị bệnh viêm tử cung, vệ sinh phòng bệnh, việc thực hiện tiêm phòng cho đàn lợn; các biểu hiện của đàn lợn khi bị bệnh và biện pháp phòng và điều trị bệnh viêm tử cung mà chủ trại chăn nuôi lợn thường sử dụng.
3.3.2. Quan sát, mô tả
- Trạng thái bình thường của lợn không mắc bệnh: con vật nhanh nhẹn, tỉnh táo; đi đứng, ăn uống bình thường; màu sắc da hồng, lông bình thường; niêm mạc không bị tổn thương …
- Trạng thái khi lợn mắc bệnh: Nái mắc bệnh viêm tử cung chủ yếu là lợn nái giai đoạn sinh sản, và bị ở thể viêm nội mạc tử cung với biểu hiện:
+ Mệt mỏi, ủ rũ, thân nhiệt tăng, bỏ ăn hoặc kém ăn;
+ Dịch chảy ra ở âm hộ sau 3 ngày đẻ, lượng dịch rất nhiều màu trắng xám, hồng hoặc màu rỉ sắt, mùi tanh khắm, con vật có phản ứng đau rõ rệt đặc biệt khi động vào hàng vú thứ hai, ...
3.3.3. Chu kỳ lứa đẻ
Chu kỳ lứa đẻ là số ngày trung bình từ lứa đẻ lần này đến lứa đẻ lần kế tiếp của nái sinh sản bao gồm thời gian mang thai, thời gian nái nuôi con và thời gian lên giống sau cai sữa.
Với những nái sảy thai sau 60 ngày vẫn được tính là một lứa đẻ.
3.3.4. Mùa vụ
Việt Nam nằm trong khu vực khí hậu nhiệt đới, có bốn mùa xuân, hạ, thu, đông. Song có sự phân hóa rõ hơn là xuân – hạ và thu – đông.
Mùa tính theo khí tượng dựa vào nhiệt độ, mùa xuân từ 1/3 đến 31/5, mùa hè từ 1/6 đến 31/8, mùa thu từ 1/9 đến 31/11 và mùa đông từ 1/12 đến hết tháng 2.
3.3.5. Can thiệp bằng tay
Quan sát và theo dõi các nái có biểu hiện sau: + Mang thai dài hơn 116 ngày.
+ Bỏ ăn, dịch tiết có máu và phân lợn con nhưng không rặn, rặn nhưng không ra con.
+ Khoảng thời gian giữa mỗi con lợn dài hơn 1 giờ và bụng lợn nái vẫn
còn to.
+ Có mùi hôi, tanh dịch tiết màu nâu, xám, lợn nái đỏ mắt, kiệt sức sau khi đau bụng kéo dài, thở dốc, không đứng nổi.
Sau khi kiểm tra và đoán chắc là nái đang đẻ khó, chúng ta cần thực hiện ngay các biện pháp can thiệp xem có lợn con đang nằm kẹt ở cổ tử cung không? Nên cẩn thận vừa kiểm tra vừa xoa bóp bầu vú lợn sẽ tránh được tình trạng đang kiểm tra mà nái đứng lên. Khi kiểm tra cổ tử cung, tại đây ta có 2 trường hợp: - Không có lợn con trong cổ tử cung =>xem xét sử dụng oxytocin để tăng cường các cơn co bóp tử cung.
Khi lợn con cuối cùng khô, tiến hành kiểm tra, thăm khám lại bên trong lần nữa để xác định xem có còn lợn con không. Sau đó, bắt buộc phải tiêm kháng sinh và kháng viêm để tránh viêm tử cung, mất sữa.
* Cách can thiệp bằng tay:
Việc can thiệp cần được thực hiện một cách nhẹ nhàng. Các cơ quan bên trong dạ con rất dễ tổn thương dẫn đến viêm, sưng, chảy máu, nặng hơn có thể làm chết lợn mẹ và lợn con.
+ Nên có kiến thức về cơ quan sinh sản của heo.
+ Rửa sạch khu vực xung quanh hậu môn và âm hộ heo mẹ.
+ Cắt ngắn móng tay, cánh tay cần được rửa sạch bằng xà phòng, đeo găng tay và bôi thật nhiều gel bôi trơn.
+ Chụm đầu các ngón tay lại, khi mở mép âm hộ ra, nhẹ nhàng đưa tay vào
trong.
+ Tay có thể cảm nhận được độ rộng, hẹp của khung xương chậu. + Nếu con nái chưa sẵn sàng đẻ thì cổ tử cung sẽ đóng.
+ Chúng ta có thể đưa tay vào sâu tận bên trong cả 2 bên sừng tử cung.
+ Dạ con cần được kiểm tra xem có tổn thương không (sưng, viêm).
3.3.6. Các chỉ tiêu lâm sàng
- Thân nhiệt: Dùng nhiệt kế có khắc độ “C” theo cột thủy ngân. Gia súc dùng nhiệt kế 420C.
+ Vị trí đo: Đo ở trực tràng hoặc âm đạo. Chú ý: nhiệt độ ở trực tràng thấp hơn nhiệt độ của máu 0,5-1,00C, ở âm đạo thấp hơn ở trực tràng 0,2- 0,50C, nhưng lúc có chửa lại cao hơn 0,50C. Trong một ngày đo thân nhiệt vào buổi sáng lúc 7-9 giờ, buổi chiều lúc 16-18 giờ.
+ Phương pháp đo thân nhiệt:
Để kết quả chính xác, trước khi đo phải vẩy cho cột thủy ngân xuống dưới vạch cuối cùng. Phải sát trùng nhiệt kế trước và sau khi đo.
Trước khi đo nên làm trơn nhiệt kế bằng vazơlin hoặc bằng nước, tránh làm sây sát niêm mạc nơi đo. Khi cắm nhiệt kế phải lách nhiệt kế sang một bên làm sao cho đầu nhiệt kế tiếp xúc được với niêm mạc nơi đo.
kế. Sau 3 - 5 phút thì rút ra đọc kết quả. Cột thủy ngân dâng đến đâu thì đó là chỉ số thân nhiệt của con vật tại thời điểm đó.
- Tần số nhịp tim, tần số hô hấp:
+ Nghe gián tiếp: Dùng tai nghe chuyên dụng ống nghe 2 loa, có độ phóng đại âm thanh lớn, sử dụng thuận lợi nhưng dễ lẫn tạp âm, làm tính chất âm thay đổi.
Điều kiện nghe: Để vật nuôi nơi yên tĩnh, tránh gió to, con vật phải đứng ở tư thế thoải mái.
Nghe từ trên xuống dưới, từ trái qua phải, ở mỗi vị trí nghe đủ lâu để xác định rõ âm thanh nghe được.
Khi nghe phải có sự so sánh đối chiếu giữa 2 bên.
+ Nghe trực tiếp: Dùng tai áp sát vào cơ thể vật nuôi để nghe.
Dùng miếng vải hoặc miếng khăn sạch phủ lên vùng cần nghe để giữ vệ sinh. Khi nghe phần ngực vật nuôi thì người khám quay mặt về phía đầu vật nuôi. Còn khi nghe phần bụng của vật nuôi thì ngườ nghe quay mặt về phía sau của con vật. Khi nghe tay phía bên trong của người nghe đặt lên sống lưng của con vật.
3.3.7. Phương pháp vi khuẩn học
Chúng tôi đã tiến hành lấy mẫu (3 - 5 ml/mẫu) dịch tử cung âm đạo của lợn nái bình thường sau đẻ 72 giờ và lấy mẫu (3 - 5 ml/mẫu) dịch tử cung âm đạo của lợn bị viêm. Mẫu dịch tử cung âm đạo của lợn nái nghiên cứu được lấy vào ống nghiệm vô trùng, bảo quản trong thùng xốp có đá ở 40 C và vận chuyển về phòng thí nghiệm trong vòng 2 giờ kể từ khi lấy mẫu để nuôi cấy, phân lập vi khuẩn và kiểm tra kháng sinh đồ. Trước khi lấy dịch âm đạo, âm hộ được rửa sạch và sát trùng bằng dung dịch cồn iodin 5%.
Tiến hành xét nghiệm 15 mẫu dịch tử cung ở lợn nái bình thường và 15 mẫu dịch tử cung bị viêm.
Phân lập là khâu quan trọng trọng trong quá trình nghiên cứu vi khuẩn. Mục đích của phân lập là tách riêng các vi khuẩn từ quần thể ban đầu.
Điều quan trọng trong quá trình nuôi cấy vi sinh vật là tránh không đưa thêm vi sinh vật ngoại nhiễm vào môi trường nuôi cấy. Muốn vậy, ngoài các thao tác luôn phải được tiến hành trong điều kiện vô trùng, mọi yếu tố từ môi trường,
dụng cụ chứa, dụng cụ nuôi cấy đến các vật dụng cần thiết khác đều phải được khử trùng thích hợp để được vô trùng trước khi sử dụng.
*Các dạng mẫu cho nuôi cấy
- Dạng dịch mẫu đã được đồng nhất, dịch nuôi cấy hoặc môi trường lỏng chứa chủng vi sinh vật cần phântích.
- Dạng trên bề mặt môi trường rắn chứa thạch (1,5-2%) trong ống thạch nghiêng hay trong đĩa petri.
- Dạng mẫu nằm sâu trong môi trường rắn trong ống nghiệm thạch sâu chứa thạch mềm (0,5-0,7%).
* Dụng cụ cấy
- Que cấy thẳng: Que cấy kim loại có đầu nhọn, thường dùng để cấy vi khuẩn có tạo khuẩn ty.
- Que cấy móc: que cấy có đầu vuông góc, thường dùng để cấy vi khuẩn có tạo khuẩn ty.
- Que cấy vòng (Que khuyên cấy): que cấy kim loại đầu có vòng tròn, thường dùng cấy chủng từ môi trường rắn hoặc lỏng lên môi trường rắn, lỏng. - Que cấy trang: bằng kim loại hay thủy tinh, đầu hình tam giác, dùng để dàn trải vi khuẩn trên bề mặt thạch rắn.
- Ống hút thủy tinh dùng để chuyển một lượng vi khuẩn nhất định lên bề mặt môi trường rắn hoặc vào môi trường lỏng.
- Đầu tăm bông vô trùng để cấy giống từ môi trường lỏng lên bề mặt của môi trường rắn.
* Các thao tác vô trùng
Thao tác cấy được thực hiện trong một không gian vô trùng tạo bởi ngọn lửa đèn cồn hoặc đèn Bunsen. Ngọn lửa đèn cồn, đèn Bunsen có tác dụng oxy hóa không khí tạo không gian vô trùng, đồng thời còn được dùng để đốt khử trùng que cấy, miệng chai lọ, ống nghiệm khi mở, đóng, nút bông, nắp nhựa…
Để tránh việc gây nhiễm thông qua tiếp xúc, nhân viên thao tác cần mang găng tay hoặc tiến hành sát trùng tay bằng cồn 70o hoặc các dung dịch diệt khuẩn, tương tự như vậy tiến hành sát trùng mặt bàn thao tác trước khi bắt đầu thao tác vô trùng. Sau khi hoàn tất việc cấy chủng, tiến hành sát trùng tay, mặt bàn làm việc tương tự như trên trước khi rời phòng kiểm nghiệm.
*Kỹ thuật cấy ria trên đĩa petri
- Dùng que cấy vòng thao tác vô trùng nhúng vào dịch mẫu để có được các
vi khuẩn cần phân lập.
- Ria các đường trên đĩa petri chứa môi trường thạch thích hợp. Sau mỗi đường ria liên tục, đốt khử trùng que cấy và làm nguội trước khi thực hiện đường ria tiếp theo.
- Lật ngược đĩa, ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp trong tủ ấm.
*Kỹ thuật cấy trang
- Dùng pipet chuyển 0,1ml dịch canh khuẩn lên bề mặt môi trường thạch trong đĩa pettri.
- Nhúng đầu thanh gạt vào cồn, hơ qua ngọn lửa để khử trùng. Để đầu thanh gạt nguội trong không gian vô trùng của ngọn lửa.
- Mở đĩa petri, đật nhẹ nhàng thanh gạt lên bề mặt thạch của đĩa petri. Dùng đầu thanh gạt trải đều dịch vi khuẩn lên bề mặt thạch. Trong khi thực hiện xoay đĩa một vài lần, mỗi lần khoảng nửa chu vi đĩa tạo điều kiện cho thanh gạt trải dịch vi khuẩn đều khắp bề mặt môi trường.
- Lật ngược đĩa, ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp trong tủ ổn nhiệt.
3.3.8. Phương pháp làm kháng sinh đồ
* Trang thiết bị và vật tư
Thiết bị: Tủ an toàn sinh học; Tủ ấm Memmert 350 C, 370 C; Tủ ấm CO2; Máy đo độ đục; Máy ria kháng sinh đồ.
Dụng cụ: Đèn cồn; Que cấy; Ống thủy tinh vô trùng 5 ml; Đĩa thủy tinh
sạch và kim lấy máu để phân phối khoanh giấy kháng sinh..
Hóa chất, thuốc thử: Ống nước muối sinh lý (NaCl 0,9%) đã được hấp tiệt
trùng; Ống Mac Farland 0,5 và 1; - Đĩa thạch Muller
- Hinton thường có đường kính 90 mm (cho vi khuẩn dễ mọc: vi khuẩn đường ruột, Acinetobacter, Pseudomonadaceae ...) và máu (cho vi khuẩn khó mọc: liên cầu, phế cầu, Listeria, Neisseria ...).
*Nội dung
Bệnh phẩm: Chủng thuần, được nuôi cấy qua đêm 18 – 24 h, hoặc tăng sinh
2 – 6 h
*Kỹ thuật tiến hành
Pha huyền dịch vi khuẩn
+ Trên mặt thạch phân lập, chọn ít nhất từ ba đến năm khuẩn lạc vi khuẩn giống nhau và tách rời. Dùng que cấy chạm vào đầu mỗi khuẩn lạc vi khuẩn rồi cấy chuyển vào 4 đến 5ml môi trường lỏng thích hợp như tryptic soy broth. + Ủ canh cấy lỏng này ở 370 C cho đến khi đạt được hay hơn độ đục chuẩn MacFarland 0,5 (thường từ 2 đến 6 giờ). Huyền dịch vi khuẩn như vậy có chứa khoảng 1 - 2 x 108 CFU/ml.
+ Dùng môi trường lỏng hay nước muối sinh lý vô khuẩn để điều chỉnh độ đục của canh cấy vi khuẩn đang tăng trưởng này đến độ đục chuẩn MacFarland 0,5 bằng máy đo độ đục.Pha huyền dịch vi khuẩn trực tiếp từ khuẩn lạc vi khuẩn.
Trải huyền dịch vi khuẩn trên mặt thạch
Trong vòng 15 phút sau khi pha huyền dịch vi khuẩn, dùng một que tăm bông vô khuẩn nhúng vào huyền dịch rồi lấy lên, ép và xoay nhẹ que tăm bông trên thành ống nghiệm.
Ria đầy vi khuẩn từ que tăm bông lên mặt thạch Muller-Hinton đã để tủ ấm trước đó 10 - 15 phút bằng máy tự tạo: Đặt ngửa đĩa thạch vào vị trí để đĩa trên máy, đặt tăm bông vào tâm đĩa thạch, bật máy, từ từ kéo tăm bông từ tâm ra ngoài rìa đĩa thạch, vừa kéo vừa xoay đều tăm bông. Làm như vậy khoảng 3 lần rồi tắt máy lấy đĩa thạch ra.
Hé nắp hộp thạch đã ria vi khuẩn trong vòng 3 đến 5 phút, nhưng không quá 15 phút, để cho khô mặt trước khi đặt đĩa kháng sinh lên mặt thạch.
Đặt khoanh giấy kháng sinh lên mặt thạch đã ria vi khuẩn
Tùy theo chủng vi khuẩn làm kháng sinh đồ, chọn bộ khoanh giấy kháng sinh thích hợp để đặt lên mặt thạch. Khi đặt, phải ép nhẹ mỗi khoanh giấy đó đảm bảo chúng tiếp xúc hoàn toàn với mặt thạch bằng kim lấy máu, mỗi đĩa 7 khoanh giấy kháng sinh, cách nhau 20 mm và cách thành đĩa 15 mm. Kháng sinh khuếch tán sau khi khoanh giấy kháng sinh chạm mặt thạch, vì vậy không được dời chỗ các khoanh giấy kháng sinh sau khi đã đặt lên mặt thạch.
Ủ đĩa thạch trong tủ ấm
Trong vòng 15 phút sau khi đặt khoanh giấy kháng sinh, các đĩa thạch phải được lật úp để trong tủ ấm với nhiệt độ thích hợp. Đối với những vi khuẩn khó mọc, phải cho đĩa thạch vào tủ ấm có CO2.
* Kết quả:
Đọc kết quả: sau 24 - 48 giờ, trên bề mặt đĩa thạch xuất hiện các vòng tròn không có vi khuẩn phát triển (vòng vô khuẩn) ở mỗi đĩa kháng sinh. Đo đường kính của vòng vô trùng để xác định tính nhậy cảm của vi khuẩn với kháng sinh đó, nếu:
- Đường kính ≤ 11 mm: kháng. - Đường kính 12-15 mm: trung bình. - Đường kính ≥ 16 mm: nhậy.
3.3.9. Phương pháp bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được thực hiện trên tổng số 50 con nái bị viêm tử cung. Chia 2 lô thí nghiệm mỗi lô 25 nái mắc bệnh viêm tử cung để tiến hành điều trị.
+ Sử dụng 02 phác đồ, phác đồ 01 điều trị viêm tử cung bằng kháng sinh
Norfloxacin (đây là kháng sinh được dùng phổ biến trong chăn nuôi và mang lại
hiệu quả điều trị khá cao) được dùng làm đối chứng, phác đồ 2 (phác đồ thử nghiệm) thay thế kháng sinh này bằng chế phẩm có nguồn gốc thảo dược dạng huyền phù. Cụ thể, 02 phác đồ được chúng tôi sử dụng như sau:
* Phác đồ 1: Rivanol 0,1%, 3000ml thụt rửa tử cung ngày 1 lần, sau khi kích thích cho dung dịch thụt rửa chảy hết ra ngoài.
Dùng Norfloxacin 5mg/kg thể trọng pha trong 50ml nước sinh lý thụt vào tử cung.
Vitamin ADE, B.complex 10ml tiêm bắp ngày 1 lần. Liệu trình điều trị 3 - 7 ngày.
* Phác đồ 2: Tương tự như phác đồ 01 chỉ khác ở chỗ thay thuốc kháng
sinh Norfloxacin bằng chế phẩm có nguồn gốc thảo dược dạng huyền phù liều
01ml/5kg thể trọng.
quản lí. Lợn được điều trị ngay khi có triệu chứng viêm tử cung (sốt cao, dịch hồng, hôi thối, có mủ). Trước khi tiến hành điều trị bệnh, mẫu dịch tử cung được lấy để kiểm tra tổng số vi khuẩn hiếu khí.
Sau khi điều trị được 5 ngày, mẫu dịch tử cung lại được lấy lần 2 và kiểm tra các chỉ tiêu vi sinh như ở mẫu ban đầu.
Lợn được coi là khỏi bệnh viêm tử cung khi không còn các triệu chứng sốt, mệt mỏi, kém ăn, từ cơ quan sinh dục không còn thải dịch ra ngoài những trường hợp nghi ngờ được kiểm tra lại bằng phản ứng Whiteside test cho kết quả (-) tính. Sau khi điều trị xong tiến hành: Xác định hệu quả của phác đồ điều trị bệnh