3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn
3.2.1. Ảnh hƣởng của BAP đến khả năng tái sinh chồi invitro
Cytokinin là một trong những chất ĐHST cho sự trƣởng, phát triển của cây và đƣợc biết đến nhƣ một chất thúc đẩy quá trình phân chia tế bào. Các loại cytokinin khác nhau cĩ thể kích thích sự phát triển của các chồi bên. Do đĩ hình thành cụm chồi từ sự nhân chia chồi đỉnh ban đầu. Các loại cytokinin khác nhau cĩ sự kích thích chồi khác nhau. Tuy nhiên, bên cạnh kích thích chồi thì cytokinin cịn cĩ khả năng kích thích phân chia tế bào mơ sẹo và kích thích sự hình thành chồi trong mơi sẹo.
BAP đƣợc nhiều nghiên cứu chứng minh cĩ hiệu quả tốt trong việc tăng khả năng nhân nhanh chồi in vitro. BAP là một chất thuộc nhĩm cytokinin,
đƣợc sử dụng để kích thích sự phân hĩa, sinh trƣởng và phát triển chồi của mẫu cấy in vitro. Tác dụng chủ yếu của BAP là kích thích sự phân chia mạnh mẽ của tế bào, ảnh hƣởng rõ rệt lên sự hình thành và phân hĩa chồi (Huetteman và cs, 1993). BAP kích thích phân chia tế bào ở mơ phân sinh đỉnh từ đĩ phát sinh chồi và kích thích tạo lá.
Đoạn thân cĩ mắt lá của cây in vitro (4 tuần tuổi) nảy mầm từ hạt đƣợc
nuơi cấy trên mơi trƣờng MS bổ sung BAP ở các nồng độ 0,25-2,0 mg/l. Kết ảnh của BAP đến khả năng nhân chồi in vitro đƣợc trình bày ở bảng 3.4.
Bảng 3.4. Ảnh hưởng của BAP đến khả năng nhân chồi in vitro cây Sachi
BAP (mg/L)
Khả năng tái sinhchồi in vitro
Hệ số nhân chồi (chồi/mẫu) Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi (lá) Xuất hiện callus Xuất hiện rễ 0,25 2,94b ± 0,33 2,67b ± 0,15 4,50a ± 0,58 - + 0,50 4,57a ± 0,37 3,17a ± 0,17 4,73a ± 0,67 - + 0,75 2,13c ± 0,57 2,33c ± 0,28 3,66b ± 0,67 - + 1,00 1,72d ± 0,37 1,56d ± 0,13 3,35c ± 0,61 + - 1,25 1,38e ± 0,61 1,34e ± 0,61 3,33c ± 0,58 + - 1,50 1,33e ± 0,33 1,28e ± 0,15 3,30c ± 0,58 + - 1,75 0,97f ± 0,5 1,24e ± 0,48 2,67d ± 0,33 + - 2,00 0,88f ± 0,33 1,10f ± 0,57 1,33e ± 0,33 + -
Dấu (-) Khơng cĩ, dấu (+) Cĩ
Chú thích: Các chữ cái khác nhau trên cùng 1 cột chỉ sự sai khác cĩ ý nghĩa thống kê của trung bình mẫu với p < 0,05.
Kết quả bảng cho thấy, sau 4 tuần nuơi cấy trên mơi trƣờng cĩ bổ sung BAP (0,25 - 2 mg/L) đều cĩ ảnh hƣởng đến khả năng phát sinh chồi in vitro
của cây Sachi. Số chồi cao nhất trên mơi trƣờng MS cĩ bổ sung 0,5 mg/L BAP đạt 4,57 chồi với chiều cao chồi đạt 3,17 cm và số lá cao nhất đạt 4,73 lá/chồi. Ở nồng độ thấp nhất 0,25 BAP thì đạt 2,94 chồi với chiều cao chồi 2,67 cm và số lá đạt 4,5 lá/chồi. Ở nồng độ BAP từ 0,75- 2 mg/L cho hệ số nhân chồi thấp hơn đạt 0,88 – 2,13 chồi /mẫu và chiều cao chồi trong khoảng 1,10 – 2,33 cm và số lá đạt 1,33 – 3,66 lá/chồi.
So với một nghiên cứu trƣớc đĩ của Nikule (2020) trong nghiên cứu vi nhân giống cây Phyllanthus tenellus cho thấy, nồng độ tối ƣu của BAP là 1,0 mg/l cho khả năng phát sinh chồi cao nhất (Nikule và cs., 2020). Trong một
nghiên cứu khác của Danial (2016) về nhân giống in vitro cây Euphorbia pulcherrima. Khi nuơi cấy với BAP ở các nồng độ từ 0 – 2 mg/l thì nồng độ
0.5 mg/l BAP cho hệ số nhân chồi cao (đạt 5,887 chồi/mẫu).
Hình 3.2. Chồi in vitro cây Sachi nuơi cấy trên các mơi trường cĩ BAP khác nhau sau 4 tuần
A. 0,25 mg/l BAP B. 0,5mg/l BAP C. 0,75mg/l BAP D. 1 mg/l BAP E. 1,25 mg/l BAP F. 1,5 mg/l BAP G. 1,75 mg/l BAP H. 2 mg/l BAP Nhƣ vậy khơng cĩ sự khác biệt quá lớn trong ảnh hƣởng của BAP giữa các nghiên cứu này. Các lồi cây đều cần một lƣợng nhỏ chất kích thích sinh trƣởng để đạt khả năng nhân chồi tốt nhất. Trong các nghiên cứu cho thấy, BAP ảnh hƣởng đến hệ số nhân chồi của các giống cây thuộc họ Euphorbiaceae khác nhau là khác nhau. Tuy nhiên, ở một nồng độ thích hợp sẽ cho số chồi phát sinh nhiều nhất. Việc áp dụng BAP ở nồng độ cao gây ức chế sự kéo dài các mơ phân sinh và chuyển đổi thành cây hồn chỉnh dẫn đến làm giảm hệ số nhân chồi
in vitro (Buising và cs., 1994). Kết quả nghiên cứu của chúng tơi đƣa ra hồn tồn phù hợp với nhận định trên. Vì vậy, trong nghiên cứu ảnh huởng của BAP riêng rẽ đến sự nhân nhanh chồi in vitro Sachi, ở nồng độ 0,5 mg/L cho hệ số
A B C D
nhân chồi cao nhất 4,57 chồi/mẫu và sự sinh truởng chồi là tốt nhất (chiều cao chồi đạt 3,17 cm, số lá hình thành là 4,73 lá/chồi sau 4 tuần nuơi cấy).