Theo tiêu chuẩn ISO/FDIS 659:1998 [10]. Các axit béo được metyl hóa và xác định thành phần và hàm lượng, phân tích trên máy sắc kí khí GC hãng Thermo Finnigan Italia S.P.A. TRACE GC Ultra series tại Phòng Hóa sinh hữu cơ, Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên [10].
Thực nghiệm: Lấy 10mg hỗn hợp Lipit tổng được hòa tan với 1ml n-hexan trong lọ nhỏ nút kín, bổ sung 25ml dung dịch CH3ONa 30% và lắc kỹ trong 1 phút. Thêm vào 20mg Na2SO4 loại sạch, lắc kỹ và đem ly tâm ở chế độ 5000 vòng/phút trong 1 phút. Dịch trong, sạch ở pha trên được tách riêng, kiểm tra trên sắc ký bản mỏng (TLC) [10]. Sắc kí lớp mỏng (Thin Layer Chromatography – TLC) được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 105715), RP18, F254s (Merck). Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254nm và 368nm hoặc
31
dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% được phun đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ cho đến khi hiện màu.
Tiến hành phân tích trên máy sắc kí khí GC, cột mao quản Supelco Wax 10, (30m x 0,25mm x 0,25µm), chương trình nhiệt độ: 2000C trong 10 phút, tăng nhiệt độ từ 200 đến 2300C trong thời gian 5 phút, giữ ở nhiệt độ 2300C trong 10 phút, khí mang He. Nhận dạng axit béo bằng phần mềm nhận dạng chuyên dụng, tính toán chuyển đổi qua giá trị thời gian lưu tương đương ECL cho cột mao quản chuyên dụng có sử dụng hệ chất chuẩn là các axit béo C16:0 và C18:0. Kết quả tính theo công thức: 16:0 18:0 16:0 2 lg lg 16 lg lg x RT T ECL RT RT