Gracilaria tenuistipitata
Thu nhận axit arachidonic được tiến hành theo các bước sau:
Bước 1: Chiết lipit tổng số
Rong câu thu ở Cát Hải – Hải Phòng (1kg) được rửa sạch, cắt nhỏ và cho vào bình thủy tinh 5 lít, bổ sung 4 lít dung môi CHCl3/CH3OH 1:2 (V/V) ngâm chiết dịch trong 48 giờ ở nhiệt độ phòng sau đó rút toàn bộ dịch. Bổ sung 1,3 lít CHCl3, tiếp tục ngâm trong 24 giờ. Gom 2 phân đoạn thu được và rửa nước 2 lần, sau đó làm khan bằng Na2SO4. Quay cất loại dung môi, thu lipit tổng.
Bước 2: Thuỷ phân lipit tổng
Từ nguyên liệu dầu rong câu chỉ vàng (lipit tổng), chúng tôi tiến hành thủy phân dầu nhằm thu được hỗn hợp tổng các axit béo ở dạng tự do, tạo điều kiện thuận lợi cho giai đoạn làm giàu axit không no bằng cách tách các axit béo no và không no. Quá trình thủy phân sử dụng NaOH và dung môi là etanol. Điều kiện tiến hành phản ứng thủy phân như sau: Thời gian 120 phút; Nồng độ cồn 70%; Nhiệt độ 750C [3]. Sơ đồ quy trình thủy phân được thực hiện như sau:
32
Sơ đồ 2.1: Quy trình thủy phân lipid tổng
NaOH 5%/C2H5OH 70%
Tách axit béo H2SO4 10%
Rửa loại axit vô cơ Nước cất
Tách nước
n-hexan
Làm khan Na2SO4
Cô quay loại dung môi n-hexan
Hỗn hợp axit béo tự do (2,62g) Xà phòng hóa Dầu rong (3,18g) Gia nhiệt 750C
33
Bước 3: Làm giàu AA bằng phương pháp tạo muối với LiOH
Hỗn hợp các axit béo sẽ tạo muối với LiOH trong dung môi axeton, các muối của axit béo no sẽ kết tủa và được lọc để loại ra. Các muối của axit béo không no sẽ tan, độ tan của muối này tăng dần theo số nối đôi của gốc axit béo vì vậy các axit béo càng nhiều nối đôi như AA sau khi phản ứng sẽ giữ lại trong dịch axeton. Chúng tôi đã khảo sát và chọn các điều kiện tối ưu cho phản ứng làm giàu AA bằng phương pháp tạo muối với LiOH là: Thời gian phản ứng tạo muối là 60 phút; Tỉ lệ LiOH/axit béo là 2:1; Nhiệt độ phản ứng từ 35oC ÷ 40oC [19].
Thực nghiệm:
Hòa tan hỗn hợp axit béo tự do trong acetone (V = 10ml), giữ ổn nhiệt 40oC, bổ sung 5ml dung dịch LiOH bão hòa (4N) cho tới khi pH = 9 thì thêm 30ml dung dịch acetone, để nguội từ từ. Hỗn hợp được làm lạnh đến nhiệt độ phòng và giữ trong 1 giờ. Lọc dịch acetone bằng giấy lọc, phần dịch thu được pha loãng với 250ml nước, axit hóa với HCl đến pH = 3, chiết với ete dầu hỏa 4 lần x 50ml. Loại nước bằng Na2SO4, sau đó đem quay cất đuổi dung môi thu được 1,14g các axit béo không no (UFA).