CHƯƠNG 2 CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM
2.1. NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phương pháp chiết mẫu thực vật
Mẫu thực vật thường được chiết theo phương pháp chiết rắn – lỏng. Phương pháp này có nhiều kĩ thuật chiết như: kỹ thuật chiết ngấm kiệt, kỹ thuật chiết ngâm dầm, kỹ thuật chiết bằng máy chiết Soxhlet, kỹ thuật chiết bằng lôi cuốn hơi nước…
Đối với kĩ thuật chiết ngấm kiệt : Mẫu thực vật khô được chiết lần lượt với từng loại dung môi n–hexan, EtOAc và MeOH. Với mỗi loại dung môi được chiết ba lần. Cất loại dung môi dưới áp suất thấp bằng máy quay cất chân không sẽ thu được các cao chiết tương ứng để tiếp tục nghiên cứu.
Đối với kĩ thuật chiết ngâm dầm: Ngâm mẫu thực vật (bột cây) trong bình chứa bằng thủy tinh hoặc thép khơng rỉ, bình có nắp đậy. Tránh sử dụng bình bằng nhựa vì dung mơi hữu cơ có thể hịa tan một ít nhựa, ảnh hưởng đến kết quả.
Rót dung mơi tinh khiết (H2O, MeOH) vào bình cho đến bề mặt của lớp bột cây. Chiết mẫu ở nhiệt độ từ 800C – 900C. Sau đó, dung dịch chiết được lọc ngang qua một tờ giấy lọc. Quá trình chiết được lặp lại nhiều lân, mỗi lần chiết khoảng 5h. Gộp dịch chiết, cất loại dung môi dưới áp suất thấp bằng máy quay cất chân không, thu được cao chiết tổng. Có thể gia tăng hiệu quả chiết bằng cách thỉnh thoảng đảo lộn, xốc đều hoăc sử dụng máy siêu âm. Cao chiết tổng này được chế thêm nước và chiết phân lớp lần lượt với MeOH và CH2Cl2 bằng phễu chiết. Với mỗi loại dung môi thực hiện chiết 3 lần. Các dịch chiết được cất loại dung môi sẽ thu được các cao chiết tương ứng (cao chiết MeOH và CH2Cl2) để tiếp tục nghiên cứu.
Trong khuôn khổ đề tài này, chúng tôi thực hiện việc chiết mẫu theo kỹ thuật chiết ngâm dầm.