CHƯƠNG 2 CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM
2.2.6. Cách nạp silicagel vào cột
Để việc tách chất được tốt, silicagel phải được nạp vào cột một cách đồng nhất để hạn chế việc “nứt” cột, bất thường. Silicagel được nạp vào cột theo hai cách.
a. Nạp silicagel ở dạng sệt
Cố định cột trên giá. Nếu đầu ra của cột khơng có lớp thuỷ tinh xốp thì ta cho một lớp bơng mỏng vào đáy để ngăn khơng cho silicagel chảy xuống bình hứng. Cho hệ dung mơi chạy cột ban đầu vào bình đựng (cốc, ca nhựa). Cân lượng silicagel cần thiết (đã tính tốn xác định được ở trên) cho vào bình đựng đều đặn, mỗi lần một lượng nhỏ và khuấy đều.
Lưu ý: không nên thực hiện ngược lại nghĩa là rót dung mơi vào
silicagel bởi vì silicagel khi gặp dung mơi sẽ phát nhiệt, có thể làm vón cục, khơng đồng nhất.
Lượng dung mơi phải vừa đủ để hỗn hợp không được quá sệt khiến bọt khí sẽ bị bắt giữ trong cột và cũng khơng được q lỏng.
Rót hỗn hợp sệt vào cột qua một phễu lọc và mở nhẹ khố để dung mơi chảy xuống bình hứng (dung môi này tiếp tục được dùng để rót trở lại đầu cột).
Tiếp tục rót hỗn hợp vào cột đến hết số lượng, vừa rót vừa gõ nhẹ thành cột bằng thanh cao su để silicagel nén đều trong cột.
Sau khi nạp xong cho dung môi chảy đều qua cột hai, ba lần để cột được đồng nhất.
Lưu ý: nhất thiết không để đầu cột bị khơ, nghĩa là ln ln có dung
mơi phủ trên phần đầu cột.
Sau khi nạp cột xong, mặt thoáng silicagel phải phẳng. Nếu mặt thống chưa phẳng ta có thể dùng đũa thuỷ tinh khuấy phần dung mơi sát mặt thống làm xáo trộn phần trên đầu cột rồi để yên cho silicagel lắng xuống từ từ tạo nên mặt thoáng bằng phẳng.
Với sắc kí cột sephadex ta thao tác tương tự nhưng cần ngâm sephadex với dung môi một thời gian để sephadex có thể trương nở ổn định trước khi cho vào cột.
b. Nạp silicagel ở dạng khô
Cột được giữ thẳng đứng trên giá. Cho miếng bông nhỏ vào đáy cột (nếu cột khơng có lớp thuỷ tinh xốp), rót dung mơi chạy côt ban đầu vào khoảng hai phần ba cột.
Cho từ từ silicagel dạng khô vào cột qua phễu lọc, vừa cho vào vừa gõ nhẹ thành cột. Khi lớp silicagel trong cột cao khoảng 2 cm thì mở nhẹ khố và cho dung mơi chảy xuống bình hứng (dung mơi này tiếp tục được rót trở lại đầu cột). Sau khi nạp xong, cho dung môi chảy qua vài ba lần để cột được ổn định trước khi nạp mẫu vào.
Thông thường người ta nạp silicagel vào cột ở dạng sệt [2].