6. Bố cục của luận văn
2.2.1. Khảo sát khối lƣợng cao chiết trong mỗi loại nguyên liệu
* Nguyên liệu: Bột lá Thầu dầu của cây lá to, lá nhỏ; Bột rễ Thầu dầu của cây lá to, lá nhỏ; Bột cành, thân Thầu dầu của cây lá to, lá nhỏ.
* Tiến hành: Cho vào 4 bình tam giác nút nhám mỗi bình 100g bột nguyên liệu các loại, thêm vào 800ml ethanol 80o, chiết 3 lần, mỗi lần 24 giờ. Dịch chiết đƣợc cô đuổi dung môi đến cao khô, cân đến khối lƣợng không đổi.
2.2.2. Thử hoạt tính kháng khuẩn
Thử hoạt tính kháng khuẩn bằng phƣơng pháp khuếch tán qua giếng thạch với các chủng vi khuẩn Gram (-) và Gram (+) tại Phòng Nghiên Cứu Vi Sinh – khoa Sinh – Đại học Sƣ Phạm – Đại học Đà Nẵng.
- Dịch chiết từ bột các bộ phận cây thầu dầu trong dung môi ethanol 80o. - Một số chủng vi sinh vật kiểm định.
* Kiểm định khả năng kháng khuẩn gây bệnh
Vi khuẩn Gram (-) : Escherichia coli;. Salmonella typhi.
Vi khuẩn Gram (+): Bacillus subtilis.
* Hóa chất
- Môi trƣờng dùng để nuôi cấy vi khuẩn: Môi trƣờng cao thịt pepton - Cao thịt: 3g/l. - NaCl: 5g/l.
- Agar: 10g/l. - Nƣớc cất: 1000ml. - Pepton: 10g/l. - pH : 7,0
* Dụng cụ
- Pipet. - Ống nghiệm. - Bông không thấm nƣớc. - Tử cây vi sinh. - Tủ ủ, tủ lạnh. - Cốc thủy tinh.
- Đèn cồn. - Máy quang phổ.
- Đĩa peptri. - Que cây, que gắp. - Dụng cụ chiết. - Giá để ống nghiệm. - Đũa thủy tinh. - Máy hiệu chỉnh pH.
Hình 2.2. Buồng cấy vi sinh vô trùng (a) và đĩa peptri đã được đỗ môi trường cấy vi sinh(b)
Nguyên tắc: Ức chế tăng trƣởng của vi sinh vật chỉ thị bằng dịch chiết từ các bộ phận của cây thầu dầu. Kiểm tra bằng khả năng khuếch tán qua giếng thạch.
Cách thực hiện:
- Trên môi trƣờng agar trải vi sinh vật chỉ thị vào. - Dùng ống nhôm đục 2 lỗ thạch đƣờng kính 8 mm.
- Lấy 0,1ml dịch chiết các bộ phận cây thầu dầu cho vào hai lỗ.
- Cho vào tủ lạnh 4oC trong thời gian 5 -6 giờ để dịch chiết khuếch tán ra môi trƣờng.
- Ủ hiếu khí trong tủ ấm với nhiệt độ và thời gian phù hợp với từng vi sinh vật.
- Quá trình đục lỗ: Tất cả quá trình thực hiện bên trong tủ cấy vô trùng, mở nắp đĩa peptri, dùng ống nhôm đƣờng kính 8mm khử trùng trên ngọn lửa đèn cồn. Đục lỗ thạch. Đậy nắp đĩa lại.Hơ qua ngọn lửa đèn cồn và bảo quản bằng màng bọc thực phẩm.