6. Bố cục của luận văn
2.4. PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN NHÓM CHỨC VÀ ĐỊNH
DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÁC PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT TỪ TỔNG CAO ETHANOL
2.4.1. Phân tích định tính thành phần nhóm chức các phân đoạn cao chiết từ tổng cao ethanol
a. Định tính alkaloid
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15 ml dung dịch HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Ống 1: thêm vào 1-2 giọt thuốc thửMayer, nếu xuất hiện kết tủa trắng là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1-2 giọt thuốc thửDragendorff, nếu xuất hiện màu cam đỏ là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 3: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Wagner, nếu xuất hiện kết tủa màu cam nâu là phản ứng dƣơng tính.
b. Định tính flavonoid
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15 ml methanol, đun nóng cho tan và lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Ống 1: thêm vào 1-2 giọt axit sunfuric đậm đặc, đun trong bình cách thủy vài phút, dung dịch xuất hiện màu đỏ hoặc hồng là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1-2 giọt NaOH 1%/etanol, nếu xuất hiện màu đỏ nâu hoặc đỏ tím là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 3: thêm vào 1-2 giọt AlCl3/etanol 1%, nếu xuất hiện màu xanh lục là phản ứng dƣơng tính.
c. Định tính terpenoid - steroid
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15 ml clorofom, khuấy đều, lọc qua giấy lọc,lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Ống 1: thêm vào 1-2 giọt H2SO4 đậm đặc, nếu dung dịch đổi sang màu đỏ % mcao phân đoạn = x 100
mcao phân đoạn mcao ethanol
đậm hoặc xanh tímlà phản ứng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1-2 giọt dung dịch vanillin 1% trong etanol, 1 giọt HCl đậm đặc. Nếu dung dịch chuyển sang màu xanh lục hoặc tímlà dƣơng tính.
- Ống 3: thêm vào 2 giọt anhidric acetic rồi thêm vào tiếp 2 giọt H2SO4 đậm nếu dung dịch chuyển sang màu xanh lục hoặc cam đỏ là phản ứng dƣơng tính.
d. Định tính glycosid
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 2ml dung dịch NaOH 10%, đun cách thủy đến khô. Hòa tan cặn trong 5ml clorofom. Lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính.
- Ống 1: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Keller-Kilian (100ml axit axetic loãng + 1 ml Fe2(SO4)3 5%) và 1-2 giọt H2SO4 đậm đặc. Nếu xuất hiện màu xanh lục sau 1-2 phút là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Tollens, nếu xuất hiện kết tủa bạc là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 3: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Phenol–H2SO4, nếu dung dịch chuyển sang màu nâu là phản ứng dƣơng tính.
e. Định tính phenol
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15ml ethanol, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Ống 1: thêm vào 1 ml vanilin 1% trong HCl, dung dịch chuyển sang màu trầm đậm hoặc đỏ là phản ứng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1ml dung dịch FeCl3 5% trong ethanol. Nếu xuất hiện trầm hiện màu đỏlà phản ứng dƣơng tính.
- Ống 3: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Bortrager (KOH 50%/methanol). Nếu xuất hiện màu đỏ, tím hoặc xanh lục là phản ứng dƣơng tính.
f. Định tính tanin
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15ml ethanol, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Ống 1: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Gelatin mặn (NaCl 5g + gelatin 0,5 g hòa tan trong 100 ml nƣớc cất). Nếu xuất hiện trầm hiện màu vàng dƣơng tính.
- Ống 2: thêm vào 1-2 giọt thuốc thử Stiasny (formol 36% 20 ml + HCl đậm đặc 10 ml). Nếu xuất hiện trầm hiện màu đỏ là phản ứng dƣơng tính.
g. Định tính sesquyterpen-lacton
Lấy 0,1 gam cao chiết, thêm 15ml chloroform, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào ống nghiệm 5ml dịch lọc, thử bằng thuốc thử Tollen, nếu có lớp gƣơng bạc bám trên thành ống nghiệm hoặc có kết tủa Ag màu đen dƣới đáy ống nghiệm thì phản ứng dƣơng tính.