4. Nội dung nghiên cứu
2.5. PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT
Các chủng vi khuẩn kiểm định được sử dụng trong thí nghiệm gồm Vi khuẩn Gram (-) : Pseudomonas aeruginosa, E.Coli, Klebsilla Vi khuẩn Gram (+) : Bacillus cereus
Các chủng vi khuẩn được nuôi cấy từ ống chủng gốc, trên môi trường LB đặt tại 370C, ủ qua đêm
Phương pháp thử hoạt tính ức chế khuẩn bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch. Phương pháp thử hoạt tính ức chế vi khuẩn là phương pháp của Hadacek et al(2000)
Vi khuẩn sau khi được hoạt hóa từ ống chủng gốc trên môi trường nuôi cấy LB, một khuẩn lạc được cấy chuyển sang 5 ml môi trường nuôi cấy lỏng và lắc qua đêm ở nhiệt độ 370C. Đĩa thử hoạt tính được chuẩn bị bằng cách cấy trải 200 μL dịch khuẩn, nồng độ tương đương 4-5 x 108 CFU/ml lên bề mặt đĩa Petri có chứa môi trường nuôi cấy đặc, để khô và đục 2-3 giếng, đường kính khoảng 6 mm sao cho mỗi giếng cách nhau khoảng 2-3 cm.
Chuẩn bị dịch chiết thử (dung môi) vào các giếng thạch trên đĩa Petri và giữ các đĩa thí nghiệm ở nhiệt độ phòng trong 2 tiếng, tới khi dịch chiết từ các giếng khuếch tán ra môi trường nuôi cấy vi khuẩn. Sau đó, đặt các đĩa vào tủ ấm 300C trong 24 giờ. Hoạt tính ức chế khuẩn được đánh giá bằng cách đo bán kính (BK) vòng ức chế vi sinh vật bằng công thức:
38
BK = D – d Trong đó D là đường kính vòng vô khuẩn
d là đường kính lỗ khoan thạch.
Thí nghiệm được lặp lại ba lần và lấy giá trị bán kính trung bình.
Bố trí thí nghiệm : ảnh hưởng của dung môi đến sự sinh trưởng của các chủng vi khuẩn kiểm định
Chú thích : Số 1 ứng với lỗ thạch chứa nước cất, Số 2 ứng với lỗ thạch chứa dung môi