4. Nội dung nghiên cứu
3.3. XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG
TRONG DỊCH CHIẾT
Qua các thí nghiệm ở mục 3.1 và 3.2, các dịch chiết của Lá cây lim xanh với bốn dung môi khác nhau về độ phân cực đều cho thấy sự xuất hiện của alkaloid thông qua các phản ứng màu. Cụ thể dịch chiết bằng chloroform cho thấy lượng
48
alkaloid thu được là nhiều nhất. Tuy nhiên kết quả thử hoạt tính sinh học lại cho thấy các dung môi phân cực mạnh như butanol và ethyl acetate lại cho tính kháng khuẩn mạnh hơn so với 2 dung môi kém phân cực còn lại. Điều này có thể được giải thích là do bên cạnh các alkaloid, có nhiều hợp chất khác có mặt trong dịch chiết từ lá cây lim xanh có hoạt tính kháng khuẩn mạnh cụ thể là các hợp chất phenolic. Vì vậy, trong các thí nghiệm tiếp theo tôi sẽ khảo sát bước đầu thành phần của dịch chiết bằng ESI-MS.
Sau khi chiết phân đoạn từng dung môi, thu được khối lượng cao chiết cân được thể hiện trong bảng 3.4 như sau:
Bảng 3.4. Khối lượng cao sau khi chiết từng phân đoạn với các dung môi : n- hexane, chloroform, n-butanol, ethyl acetat.
Dung môi chiết phân đoạn
Khối lượng cao chiết với methanol (g)
Khối lượng cao Chiết với ethanol/nước (g) hexane 4,003 3,900 Chloroform 4,223 4,321 butanol 3,564 3,786 ethyl acetat 3,211 3,485 Nhận xét:
Dựa vào bảng 3.4 mô tả khối lượng cao chiết với từng dung môi: hexane, chloroform, butanol, ethyl acetate. Qua bảng 3.4, khối lượng cao thu được nhiều nhất sau khi chiết ứng với dung môi cloroform, cũng như không có chênh lệch đáng kể khi dung môi chiết ban đầu là methanol hay hỗn hợp ethanol/nước (95:5; v/v). Điều này cho thấy có thể tuỳ theo mục đích nghiên cứu và ứng dụng về sau mà chọn methanol hoặc hỗn hợp ethanol/nước (95:5; v/v) sao cho phù hợp.
Sau khi chiết phân đoạn được các mẫu dịch chiết ứng với dung môi: hexane, cloroform, butanol, ethyl acetate. Gởi mẫu đến tại Trung tâm Nghiên cứu vật liệu cấu trúc Nano và phân tử (INOMAR)- Phường Linh Trung- quận Thủ Đức- Thành phố Hồ Chí Minh. Thu được kết quả như sau:
a. Các hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với Methanol
49
Hình 3.9. Phổ ESI-MS của dịch chiết hexane có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết n-hexane có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.5
Bảng 3.5. Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết hexane
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 357 Prolithospermic acid C18H13O8
Từ bảng 3.5, hợp chất đã được định danh là Prolithospermic acid là một dihydroxybenzoic acid, một loại phenolic acid.
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với chloroform
50
Hình 3.10. Phổ ESI-MS của dịch chiết chloroform có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với cloroform có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.6
Bảng 3.6.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với chloroform
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 359 Rosmarinic acid C18H11O6
2 565 Ethyl lithospermate C29H25O12
51
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
3 565 Dimethyl lithospermate C29H25O12
Từ bảng 3.6, hợp chất đã được định danh tìm thấy là Rosmarinic acid, Ethyl lithospermate, Dimethyllithospermate. Rosmarinic acid là một hợp chất hóa học được tìm thấy trong nhiều loại thực vật. Nó có tính chất chống oxy hóa mạnh Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với butanol
Hình 3.11. Phổ ESI-MS của dịch chiết butanol có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết butanol có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.7:
52
Bảng 3.7.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với butanol
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 153 Protocatechuic acid [C7H5O4]
Từ bảng 3.7, hợp chất được định danh là Protocatechuic acid. Protocatechuic acid là một axit dihydroxybenzoic, một loại axit phenolic. Nó là một chất chuyển hóa chính của các polyphenol chống oxy hoá có trong trà xanh. Nó có ảnh hưởng hỗn hợp lên tế bào bình thường và ung thư trong các nghiên cứu in vitro và in vivo
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với ethyl acetate
Hình 3.12. Phổ ESI-MS của dịch chiết ethyl acetate có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với ethyl acetate có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.8
53
Bảng 3.8.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với ethyl acetate
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 717 Salvianolic acid B [C36H29O16]
2 717 Salvianolic acid E [C36H29O16]
Từ bảng 3.8, hợp chất được định danh là Salvianolic acid B và Salvianolic E. Hai hợp chất Salvianolic acid B và Salvianolic E là các chất chống oxy hóa bảo vệ tế bào và chất thải gốc tự do đang được điều tra cho một loạt các điều kiện từ rối loạn nhịp tim thiếu máu đến bệnh Alzheimer
b. Một số hợp chất trong dịch chiết với Ethanol/Nước
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với hexane
54
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết n-hexane có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.9
Bảng 3.9.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với hexane
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 153 Protocatechuic acid [C7H5O4]
2 551 Monomethyl lithospermate
[C28H23O12]
Từ bảng 3.9, hợp chất được định danh là Protocatechuic acid và Monomethyllithospermate. Protocatechuic acid là một axit dihydroxybenzoic, một loại axit phenolic. Nó là một chất chuyển hóa chính của các polyphenol chống oxy hoá có trong trà xanh. Nó có ảnh hưởng hỗn hợp lên tế bào bình thường và ung thư trong các nghiên cứu in vitro và in vivo
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với chloroform
55
Hình 3.14. Phổ ESI-MS của dịch chiết chloroform có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ýtrong dịch chiết cloroform có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.10
Bảng 3.10.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với chloroform
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 313 Salvianolic acid F [C17H13O6]
Từ bảng 3.10, hợp chất được định danh là Salvianolic acid F. Hợp chất Salvianolic acid F có hoạt tính chống oxy hóa.
56
Hình 3.15. Phổ ESI-MS của dịch chiết butanol có trong lá cây Lim xanh
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với n- butanolcó trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.11:
Bảng 3.11.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với butanol
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 313 Salvianolic acid F [C17H13O6]
2 551 Monomethyl lithospermate
57
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
3 295 1,2- Didehydrocryptotanshin one [C18H17O3]b 4 295 Tanshinone IIA [C18H17O3]b
Từ bảng 3.11, một số hợp chất được định danh là Salvianolic acid F, Monomethyl lithospermate, 1,2-Didehydrocryptotanshinone, Tanshinone IIA. Các hợp chất này có khả năng chống viêm, chống oxy hóa.
Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với ethyl acetate
Hình 3.16. Phổ ESI-MS của dịch chiết ethyl acetate có trong Lá cây Lim xanh.
58
acetate có trong lá cây Lim xanh được trình bày qua bảng 3.12
Bảng 3.12.Một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý trong dịch chiết với ethyl acetate
STT m/z Tên cấu tử CTPT Công thức cấu tạo
1 277 Tanshinone [C20H19O5]b 2 313 Salvianolic acid F [C17H13O6] 3 357 Prolithospermic acid C18H13O8 4 537 Lithospermic acid [C18H15O8]
Từ bảng 3.12, một số hợp chất có hoạt tính sinh học đáng chú ý được định danh là Tanshinone, Salvianolic acid F, Protocatechic acid, Lithospermic acid. Các hợp chất này có khả năng chống viêm, chống nhiễm trùng và có khả năng chống oxy hóa.
59
Nhận xét: Các kết quả ESI-MS cho thấy, so với các dịch chiết trong dung môi n-hexan và chloroform, các dịch chiết trong dung môi butanol và ethyl acetate cho thấy thành phần chứa nhiều các hợp chất phenolic. Mặc dù các mẫu chiết đều cho thấy các peak m/z ứng với khối lượng phân tử của các cassaine diterpene alkaloid, tuy nhiên đều lẫn tạp rất nhiều. Vì vậy, việc phân lập bằng các phương pháp sắc kí khác sau khi thu được các phân đoạn chiết để định danh cụ thể các cassaine diterpene alkaloid có trong lá của cây Lim xanh là điều cần thiết.