PHẦN IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1. Ảnh hưởng của thời gian khử trùng bằng dung dịch Javen 60%
khả năng tạo mẫu vô trùng
Khử trùng mẫu là giai đoạn tiên quyết, là nền tảng tạo nên sự thành công của quá trình nuôi cấy in vitro. Đây là giai đoạn đầu tiên trong quá trình nuôi cấy in vitro
- giai đoạn khử trùng vật liệu nuôi cấy. Mục đích của giai đoạn này là tạo ra được vật liệu vô trùng, sạch bệnh. Vì vậy, yêu cầu tất yếu là giảm số lượng mẫu chết và mẫu nhiễm; đồng thời tăng số lượng mẫu sống không nhiễm. Có 2 phương pháp thường dùng để xử lý mẫu là phương pháp vật lý và phương pháp hóa học. Ở thí nghiệm này, nhóm tác giả sử dụng chất hóa học có tác dụng diệt khuẩn và nấm là dung dịch Javen 60% và thời gian khử trùng khác nhau để khử trùng vật liệu nuôi cấy: 5 phút,
10 phút, 15 phút và 20 phút, mẫu đối chứng khử trùng bằng nước cất vô trùng. Sau 4 tuần nuôi cấy, nhóm tác giả tiến hành đánh giá kết quả ảnh hưởng của chất khử trùng nghiên cứu tới khả năng tạo vật liệu sạch nấm, vi khuẩn. Kết quả thể hiện ở bảng 4.1 như sau:
Bảng 4.1. Kết quả ảnh hưởng của thời gian khử trùng bằng dung dịch Javen 60% đến khả năng tạo mẫu vô trùng (sau 4 tuần nuôi cấy)
Công thức CT1(ĐC) CT2 CT3 CT4 CT5
Kết quả khử trùng đoạn thân Đẳng sâm Bắc bằng Javen 60% sau 4 tuần được thể hiện ở bảng 4.1.
Kết quả cho thấy CT1 (đối chứng) chỉ xử lý bằng nước cất vô trùng toàn bộ mẫu nghiên cứu đều bị nhiễm. Khi khử trùng bằng dung dịch Javen 60% trong thời gian 5 phút tỷ lệ mẫu sống không nhiễm được cải thiện với tỉ lệ sống khá thấp chỉ đạt 15,56%. Tăng thời gian khử trùng lên 10 phút cho tỷ lệ mẫu sống không nhiễm cao nhất đạt 61,11%. Tiếp tục tăng thời gian khử trùng lên 15 phút và 20 phút kết quả tỷ lệ mẫu sống không nhiễm giảm dần do thời gian tiếp xúc với mẫu dài nên mẫu bị chết tăng lên. Như vậy khi khử trùng mẫu Đẳng sâm Bắc bằng dung dịch Javen 60% thời gian thích hợp là 10 phút.
Hình 4.1. Kết quả khử trùng mẫu đoạn thân Đẳng sâm Bắc bằng dung dịch Javen 60% trong 10 phút