của chủng virus NIBRG-14 (MSL)
Chủng NIBRG-14 là chủng virus tái tổ hợp bằng kỹ thuât di truyền đảo ngược từ chủng virus cúm độc lực H5N1 phân lập được từ 1 bệnh nhân người Việt nam mang tên A/Vietnam/1194/2004 và 1 chủng virus cúm A/H1N1 phòng thí nghiệm mang tên PR/8/34. Tiến hành kiểm tra gen của chủng NIBRG-14 thực hiện tại Viện Công Nghệ Sinh Học. Kết quả thể hiện ở hình 3.2, hình 3.3 và hình 3.4.
Hình 3.2. Kết quả thu nhận các đoạn DNA của các gen N1 và gen H5 bằng kỹ thuật PCR từ virus có nguồn gốc khác nhau
- Đoạn gen N1 ở đầu 5’ có kích thước 0,8 kb: Giếng 1-2 chủng NIBRG-14; giếng 3-4 chủng vắc xin nhập từ Trung Quốc; giếng 13 mẫu đối chứng do FAO cung cấp.
- Đoạn gen H5 ở đầu 3’ có kích thước 1,0 kb ở đầu 3’ của gen H5: Giếng 5 mẫu đối chứng của FAO; giếng 6 -7 chủng NIBRG-14.
- Đoạn gen N1 đầu 3’ có kích thước 0,75 kb: Giếng 8: Mẫu đối chứng của FAO cung cấp; giếng 9-10 chủng NIBRG-14; giếng 11-12 chủng vắc xin Trung Quốc; giếng 13; giếng M là chỉ thị DNA chuẩn về trọng lượng phân tử.
Nhận xét:
Kết quả kiểm tra gen của chủng NIBRG-14 ở hình 3.2 cho thấy chủng giống vắc xin được tạo bởi 6 gen cấu trúc của virus cúm A/H1N1 nguồn gốc Puerto Rico A/PR/8/34(H1N1) – là giống chuẩn để sản xuất vắc xin cúm nói chung; và 2 gen kháng nguyên đặc trưng là H5 và N1 của virus cúm A/Vietnam/1194/2004(H5N1) phân lập trên một bệnh nhân ở Thái Bình, Việt Nam năm 2004, trong đó gen H5 đã loại bỏ vùng “độc” bằng kỹ thuật gen. Kết quả kiểm tra cho thấy sản phẩm thu được đúng như lý lịch giống gốc của mẫu đối chứng do NIBSC cung cấp.
Khi tiến hành phân tích trình tự nucleotide của gen H5 của vắc xin, cho thấy: Gen H5 đã được ổn định bằng kỹ thuật gen, loại bỏ 12 nucleotide ở vùng cắt của protease và đột biến 3 điểm ở hai đầu của vùng này để giảm độc lực và an toàn khi sử
dụng làm vắc xin (hình 3.3). Chủng giống gốc có tên: NIBRG-14 (H5N1) VE 22339603/ 246.
Hình 3.3. Kết quả so sánh trình tự gen H5 đột biến bằng kỹ thuật di truyền ngược của chủng NIBRG-14 với chủng VN/1194/2004(H5N1) tự nhiên. Gen H5 của chủng NIBRG-14 được đột biến từ gen H5 của chủng /Vietnam/1194/2004(H5N1)
của Việt Nam thông qua làm mất đoạn 12 nucleotide tương đương với 4 amino acid RRRK thuộc đoạn gen có độc tính cao và 3 đột biến điểm đổi A thành C
nhằm ngăn ngừa khả năng tái hợp của đoạn gen có độc lực cao này.
Gen N1 của chủng NIBRG-14 và chủng Vietnam/1194/2004(H5N1) không có gì sai khác. Toàn bộ gen này được đưa từ chủng tự nhiên vào chủng vắc xin sản xuất (hình 3.4).
Hình 3.4. Kết quả so sánh trình tự đoạn gen N1 của chủng di truyền ngược NIBRG-14 làm vắcxin và chủng A/Vietnam/1194/2004(H5N1) tự nhiên. Trình tự
nucleotide của đoạn gen N1 đã kiểm tra ở hai chủng hoàn toàn giống nhau
Chủng NIBRG-14 được tổ chức FAO và TCYTTG khuyến cáo là chủng ổn định vững bền về các đặc điểm dùng cho sản xuất vắc xin.