Phương pháp tạo chủng làm việc từ chủng gốc NIBRG-14 (MSL)

 Phương pháp gây nhiễm virus trên trứng gà có phôi 9- 11 ngày tuổi

 Ấp trứng

- Trứng gà đạt tiêu chuẩn được nhận từ trại chăn nuôi Suối Dầu.

- Khử trùng vỏ ngoài bằng choloramin 0,1% và cồn 70^o.

- Ấp trứng trong tủ ấm 37,5^oC – 38,5⁰C và độ ẩm 65- 70%.

- Sau 5 ngày soi trứng để loại bỏ những quả chết và không phát triển thành phôi.

- Sau 10 ngày chọn trứng đạt tiêu chuẩn.

 Gây nhiễm virus trên trứng có phôi

 Pha chủng virus

- Lấy 1 ống chủng gốc (10⁰) pha loãng bậc 10 trong đệm PBS lạnh để được các độ pha 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4 và 10^-5 như sau:

 10^-1: 0,3 ml chủng nguyên gốc + 2,7 ml PBS

 10^-2: 0,5 ml (10^-1) + 4,5 ml PBS

 10^-3: 0,5 ml (10^-2) + 4,5 ml PBS

 10^-4: 0,5 ml (10^-3) + 4,5 ml PBS

 10^-5: 0,5 ml (10^-4) + 4,5ml PBS

 Tiêm truyền chủng trên trứng

- Đánh dấu túi hơi và vị trí tiêm (đối diện với phôi) trên trứng

- Sát trùng điểm tiêm bằng cồn Iod 5%

- Lấy 0,2 ml chủng virus đã pha loãng tiêm vào khoang niệu đệm của trứng.

- Hàn kín điểm tiêm bằng parafin nóng chảy

- Ủ trứng ở 33,5^oC có độ ẩm 65 -70%.

- Sau 24h và 48h soi trứng để loại bỏ những quả chết.

- Sau 72h trứng được chuyển sang tủ lạnh 4^oC và để qua đêm.

Hình 2.1. Hình ảnh về quá trình đánh dấu vị trí tiêm

Hình 2.2. Hình ảnh về quá trình đục lỗ điểm tiêm

Hình 2.3. Hình ảnh về quá trình tiêm chủng vào dịch niệu đệm của trứng

Hình 2.4. Hình ảnh về quá trình hàn điểm tiêm bằng parafin

 Thu gặt dịch virus

- Cắt vỏ trứng tại vùng buồng khí

- Dùng pipette Pasteur hút dịch niệu trong từng trứng.

- Cho dịch niệu vào 1 tube vô khuẩn đặt trong đá.

- Cứ thực hiện tuần tự như vậy cho đến hết số lượng trứng đã gây nhiễm (chú ý: mỗi trứng được gặt bằng 1 pipette riêng, và được đặt trong một tube riêng).

- Kiểm tra dịch trứng: thể tích, cảm quan, tính vô khuẩn, tạp nhiễm Mycoplasma, hiệu giá ngưng kết hồng cầu (HA), hiệu giá chủng (EID50)

Hình 2.5. Hình ảnh về quá trình cắt vỏ trứng tại vùng buồng khí

Hình 2.6. Hình ảnh về quá trình dùng pipette Pasteur hút dịch niệu trong từng trứng

Hình 2.7. Hình ảnh về quá trình cho dịch niệu vào 1 tube vô khuẩn

Hình 2.8. Hình ảnh về quá trình cho dịch niệu vào tube cryo bảo quản đông băng

 Sơ đồ nhân tạo chủng WSL

Hình 2.9. Sơ đồ nhân tạo chủng WSL

Chủng gốc NIBRG-14 Trứng gà sạch có phôi 9-11 ngày tuổi

Cấy chủng Ủ 33.5⁰C/72h Gặt chủng Pha chế Kiểm tra: - Tính vô trùng - Hiệu giá HA

- Hiệu giá chủng EID50 - Tạp nhiễm Mycoplasma

Phân ống

Chủng sản xuất (bảo quản -800C) (Working Seed Lot)

Kiểm tra chủng WSL bao gồm: - Hiệu giá ngưng kết hồng cầu - Tính vô trùng