Phương pháp gây nhiễm virus trên trứng gà có phôi 9- 11 ngày tuổi
Ấp trứng
- Trứng gà đạt tiêu chuẩn được nhận từ trại chăn nuôi Suối Dầu.
- Khử trùng vỏ ngoài bằng choloramin 0,1% và cồn 70o.
- Ấp trứng trong tủ ấm 37,5oC – 38,50C và độ ẩm 65- 70%.
- Sau 5 ngày soi trứng để loại bỏ những quả chết và không phát triển thành phôi.
- Sau 10 ngày chọn trứng đạt tiêu chuẩn.
Gây nhiễm virus trên trứng có phôi
Pha chủng virus
- Lấy 1 ống chủng gốc (100) pha loãng bậc 10 trong đệm PBS lạnh để được các độ pha 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 và 10-5 như sau:
10-1: 0,3 ml chủng nguyên gốc + 2,7 ml PBS
10-2: 0,5 ml (10-1) + 4,5 ml PBS
10-3: 0,5 ml (10-2) + 4,5 ml PBS
10-4: 0,5 ml (10-3) + 4,5 ml PBS
10-5: 0,5 ml (10-4) + 4,5ml PBS
Tiêm truyền chủng trên trứng
- Đánh dấu túi hơi và vị trí tiêm (đối diện với phôi) trên trứng
- Sát trùng điểm tiêm bằng cồn Iod 5%
- Lấy 0,2 ml chủng virus đã pha loãng tiêm vào khoang niệu đệm của trứng.
- Hàn kín điểm tiêm bằng parafin nóng chảy
- Ủ trứng ở 33,5oC có độ ẩm 65 -70%.
- Sau 24h và 48h soi trứng để loại bỏ những quả chết.
- Sau 72h trứng được chuyển sang tủ lạnh 4oC và để qua đêm.
Hình 2.1. Hình ảnh về quá trình đánh dấu vị trí tiêm
Hình 2.2. Hình ảnh về quá trình đục lỗ điểm tiêm
Hình 2.3. Hình ảnh về quá trình tiêm chủng vào dịch niệu đệm của trứng
Hình 2.4. Hình ảnh về quá trình hàn điểm tiêm bằng parafin
Thu gặt dịch virus
- Cắt vỏ trứng tại vùng buồng khí
- Dùng pipette Pasteur hút dịch niệu trong từng trứng.
- Cho dịch niệu vào 1 tube vô khuẩn đặt trong đá.
- Cứ thực hiện tuần tự như vậy cho đến hết số lượng trứng đã gây nhiễm (chú ý: mỗi trứng được gặt bằng 1 pipette riêng, và được đặt trong một tube riêng).
- Kiểm tra dịch trứng: thể tích, cảm quan, tính vô khuẩn, tạp nhiễm Mycoplasma, hiệu giá ngưng kết hồng cầu (HA), hiệu giá chủng (EID50)
Hình 2.5. Hình ảnh về quá trình cắt vỏ trứng tại vùng buồng khí
Hình 2.6. Hình ảnh về quá trình dùng pipette Pasteur hút dịch niệu trong từng trứng
Hình 2.7. Hình ảnh về quá trình cho dịch niệu vào 1 tube vô khuẩn
Hình 2.8. Hình ảnh về quá trình cho dịch niệu vào tube cryo bảo quản đông băng
Sơ đồ nhân tạo chủng WSL
Hình 2.9. Sơ đồ nhân tạo chủng WSL
Chủng gốc NIBRG-14 Trứng gà sạch có phôi 9-11 ngày tuổi
Cấy chủng Ủ 33.50C/72h Gặt chủng Pha chế Kiểm tra: - Tính vô trùng - Hiệu giá HA
- Hiệu giá chủng EID50 - Tạp nhiễm Mycoplasma
Phân ống
Chủng sản xuất (bảo quản -800C) (Working Seed Lot)
Kiểm tra chủng WSL bao gồm: - Hiệu giá ngưng kết hồng cầu - Tính vô trùng