Việc lựa chọn pH của dung dịch đệm chiết là rất quan trọng. Ở môi trường pH khác nhau trạng thái tồn tại của các Nisin là khác nhau, do đó sẽ ảnh hưởng đến việc hòa tan được chất phân tích trong mẫu. Dựa vào tính chất của Nisin và tham khảo một số tài liệu [25] [38] [40] [57], cho thấy khi pH của mẫu ở môi trường pH = 2,0 thì sự hòa tan của Nisin A và Nisin Z là tốt nhất, nên trong nghiên cứu này tiến hành khảo sát các giá trị pH từ 2,0 đến 6,6. Sử dụng nền mẫu sữa lỏng tương tự như trên không có chứa Nisin A và Nisin Z. Sau khi cân mẫu, thêm chuẩn hỗn hợp Nisin A và Nisin Z để thu được nồng độ 10µg/L trong dịch chiết cuối cùng trước khi bơm vào thiết bị LC- MS/MS. Để yên 5 phút. Tiến hành chiết mẫu theo quy trình với các giá trị pH như sau: pH = 2,0; pH = 2,5; pH = 3,0, pH = 4,0; pH = 5,0; pH = 6,6 với quy trình chiết như trên. Tính toán theo công thức (5), kết quả thu được trong hình 3.6.
Từ kết quả ở đồ thị hình 3.6 ta thấy, khi chiết ở pH = 2,0 hiệu suất Nisin thu được là cao nhất, hiệu suất giảm dần khi pH tăng dần. Dựa trên tính chất của Nisin hoà tan tốt nhất trong môi trường acid và ổn định nhất ở pH = 2,0. Cho thấy, kết quả của thực nghiệm phù hợp với tính chất của Nisin. Vì vậy, trong nghiên cứu đã lựa chọn pH = 2,0 để chiết chất phân tích ra khỏi nền mẫu và sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.