Nghiờn cứu được thực hiện với sự tỡnh nguyện tham gia của 479 gỏi mại dõm đang tập trung quản lý tại Trung tõm phục hồi nhõn phẩm Thanh Xuõn, Hải Phũng. Tất cả đối tượng gỏi mại dõm được thu thập thụng tin từ phiếu phỏng vấn, lấy mỏu (xỏc định HIV, HCV, HBV), khỏm sản phụ khoa và lấy bệnh phẩm cổ tử cung nhằm sàng lọc một số bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục (HPV,
C.trachomatis, N.gonorrhoeae) bằng phản ứng khuếch đại gen, phản ứng PCR.
PCR là phương phỏp mới đó mang lại một cuộc cỏch mạng trong di truyền phõn tử cũng như trong nghiờn cứu phõn tớch gen. Phản ứng PCR là phản ứng húa sinh phụ thuộc nhiệt độ với sự tham gia của một loại enzyme chịu nhiệt DNA polymerase, cỏc đoạn oligonucleotid mồi, DNA khuụn và một số thành phần khỏc như dung dịch đệm và cỏc nucleotide. PCR cú độ nhạy và tớnh chớnh xỏc rất cao, kết quả phản ứng thành cụng phụ thuộc chủ yếu vào chất lượng cỏc thành phần tham gia phản ứng. Một trong những vai trũ tiờn quyết đỏnh giỏ sự thành cụng của phản ứng là chất lượng DNA khuụn, trong đú nồng độ và độ tinh sạch của khuụn là những yếu tố quan trọng nhất.
Với 479 mẫu dịch bệnh phẩm cổ tử cung được tiến hành tỏch chiết DNA tổng số theo đỳng quy trỡnh kỹ thuật của kit, nồng độ DNA tổng số sau tỏch chiết cú giỏ trị trong khoảng từ 54 – 1.639 ng/àl. Đõy là khoảng dao động tương đối rộng và cú sự chờnh lệch lớn về nồng độ DNA khuụn cho phản ứng PCR. Do đú, chỳng tụi tiến hành pha loóng lượng DNA tổng số
bằng nước cất tinh sạch để đồng nhất nồng độ DNA trong khoảng chuẩn từ 50 – 500 ng/àl nhằm mục đớch tối ưu húa phản ứng nhõn bản gen.
Khuụn của PCR rất đa dạng và nồng độ khuụn cần thiết cho mỗi phản ứng tựy thuộc vào nguồn gốc khuụn. Nồng độ DNA khuụn quỏ lớn khụng chỉ cú thể làm giảm hiệu suất của DNA polymerase mà cũn cú thể làm tăng tổng hợp những sản phẩm phụ khụng mong muốn. Với DNA bacteriophage cần khoảng 20pg cho mỗi phản ứng và như vậy, nồng độ DNA để tối ưu húa phản ứng PCR trong khoảng từ 50 – 500 ng/àl [34].
Để đảm bảo 100% mẫu sản phẩm DNA khuụn hoàn toàn tinh sạch, khụng tạp nhiễm và khụng bị đứt góy thỡ quỏ trỡnh tiến hành tỏch chiết phải được thực hiện trong điều kiện đảm bảo vụ trựng tuyệt đối với quy trỡnh chuẩn theo đỳng hướng dẫn của hóng sản xuất kit. Đồng thời, tiến hành kiểm tra chặt chẽ độ tinh sạch của DNA khuụn trờn mỏy đo quang phổ NanoDrop. Mật độ quang của sản phẩm DNA sau tỏch chiết trong nghiờn cứu đo được ở bước súng 260/280 nm dao động từ 1,70 đến 1,97. Như vậy, mẫu sản phẩm DNA tổng số sau tỏch chiết hoàn toàn đảm bảo độ tinh sạch để sử dụng làm khuụn cho cỏc thớ nghiệm tiếp theo.
Để xỏc định tỷ lệ nhiễm HPV đường sinh dục ở đối tượng gỏi mại dõm trong nghiờn cứu, DNA tổng số sau tỏch chiết đó đảm bảo về nồng độ và độ tinh sạch được tiến hành khuếch đại 140 bp trờn vựng gen L1 HPV bằng phản ứng PCR sử dụng hai loại mồi là GP5+/GP6+ original và GP5+/GP6+ modified.
Lựa chọn oligonucleotid mồi là một trong những chỉ tiờu quan trọng nhất cựng với DNA khuụn quyết định tớnh đặc hiệu cũng như sự thành cụng của phản ứng PCR. Cỏc đoạn oligonucleotid mồi cú chiều dài khoảng 20-30 nucleotid thường đặc hiệu hơn cho đoạn gen đớch trờn DNA khuụn. Nồng độ mồi sử dụng cho PCR khỏc nhau theo từng thớ nghiệm và tỷ lệ mồi/khuụn đúng vai trũ đặc biệt quan trọng giỳp PCR thành cụng. Nếu nồng độ mồi quỏ
lớn sẽ khụng chỉ gõy hiện tượng ức chế phản ứng mà cũn hỡnh thành những sản phẩm phụ khụng mong muốn do bắt cặp nhầm.
Sản phẩm HPV DNA được khuếch đại sau phản ứng PCR được kiểm tra bằng phương phỏp điện di trờn gel agarose 2% và hỡnh ảnh điện di được ghi lại trờn mỏy soi chụp ảnh gel. Trờn hỡnh ảnh điện di (hỡnh 3.1) cho thấy đoạn gen L1 của HPV từ mẫu bệnh phẩm cổ tử cung đó được nhõn lờn một cỏch đặc hiệu khi sử dụng mồi GP5+/GP6+ original và mồi GP5+/GP6+ modified, chỉ tạo ra một băng duy nhất, khụng cú sản phẩm phụ. Cỏc băng điện di sỏng đồng nhất, bờ đều, sắc gọn, chứng tỏ sản phẩm PCR cú chất lượng tốt và cú thể sử dụng để xỏc định genotype HPV.
Kớch thước sản phẩm PCR được đối chiếu trờn thang DNA chuẩn (Marker) tương ứng với chiều dài dự đoỏn lý thuyết của vựng gen được nhõn lờn là 140 bp. Những mẫu cú sản phẩm PCR kớch thước 140 bp là những mẫu cú HPV DNA dương tớnh.
Trong tổng số 479 mẫu nghiờn cứu, 246 mẫu cú kớch thước 140 bp (HPV DNA dương tớnh) khi khuếch đại bằng phản ứng PCR sử dụng mồi GP5+/GP6+ original và 245 mẫu cú kớch thước 140 bp (HPV DNA dương tớnh) khi khuếch đại bằng phản ứng PCR sử dụng mồi GP5+/GP6+ modified. Tỷ lệ nhiễm HPV đường sinh dục trờn đối tượng gỏi mại dõm tại Hải Phũng phỏt hiện bằng phản ứng PCR với mồi GP5+/GP6+ original là 51,4% và với GP5+/GP6+ modified là 51,1%. Sự khỏc biệt về tỷ lệ nhiễm HPV trong nghiờn cứu phụ thuộc vào độ đặc hiệu của hai loại mồi GP5+/GP6+ được sử dụng trong phản ứng PCR, do đú, tỷ lệ nhiễm HPV sẽ được xỏc định dựa trờn kết quả giải trỡnh tự gen mẫu sản phẩm PCR khụng tương đồng khi khuếch đại bằng mồi GP5+/GP6+ original và mồi GP5+/GP6+ modified.
Theo bỏo cỏo kết quả phõn tớch tổng hợp năm 2007 (meta-analysis) từ 78 nghiờn cứu khỏc nhau trờn 157.879 phụ nữ cú xột nghiệm tế bào học cổ tử cung bỡnh thường, tỷ lệ nhiễm HPV trờn toàn thế giới là 10,4% trong đú, chõu Phi (22,1%) và Trung Mỹ (20,4%) là những khu vực cú tỷ lệ nhiễm HPV sinh dục nữ cao nhất. Chõu Âu (8,1%) và chõu Á (8,0%) cú tỷ lệ nhiễm HPV tương đương. Như vậy, đến năm 2007, ước tớnh chung cú khoảng 291 triệu phụ nữ trờn khắp thế giới nhiễm HPV, khoảng 32% số họ nhiễm HPV-16, HPV-18 và khoảng 80% phụ nữ nhiễm HPV ớt nhất một lần trong suốt đời sống tỡnh dục , ], ].
Đến năm 2010, một nghiờn cứu khỏc phõn tớch tổng hợp trờn hơn 1 triệu (1.016.719) phụ nữ cú xột nghiệm tế bào học cổ tử cung bỡnh thường đó bỏo cỏo tỷ lệ nhiễm HPV toàn cầu là 11,7% trong đú, chõu Phi và chõu Mỹ vẫn là hai chõu lục cú tỷ lệ nhiễm HPV cao nhất trờn thế giới [61]. Kết quả bỏo cỏo chứng tỏ tỷ lệ nhiễm HPV trong cộng đồng dõn cư trờn thế giới đang cú xu hướng tăng nhanh, trong đú cú sự gúp phần khụng nhỏ của nhúm đối tượng gỏi mại dõm. Do đú, hướng nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm đang là vấn đề được quan tõm ở khắp cỏc chõu lục trờn thế giới.
Nghiờn cứu trờn 503 đối tượng gỏi mại dõm tại thành phố cảng Mombasa của Kenya, chõu Phi bỏo cỏo tỷ lệ nhiễm HPV trờn gỏi mại dõm ở khu vực này là 45,5% . Tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại Peru, Tõy Nam Mỹ (50,6%) tương đồng với kết quả bỏo cỏo về tỷ lệ nhiễm HPV trờn 495 gỏi mại dõm tại Mexico, Mỹ La tinh là 48,9% [52], [55].
Kết quả bỏo cỏo tỷ lệ nhiễm HPV trờn 734 đối tượng gỏi mại dõm được thường xuyờn quản lý sàng lọc cỏc bệnh lõy truyền qua đương tỡnh dục ở thủ đụ Madrid, Tõy Ban Nha, phớa Nam chõu Âu là 39,0% [54]. Tuy nhiờn, khi
nghiờn cứu trờn 653 gỏi mại dõm tại Ghent, thành phố lớn thứ 2 của Bỉ, phớa Bắc chõu Âu nhưng khụng được quản lý sàng lọc cỏc bệnh lõy truyền qua đương tỡnh dục, tỷ lệ nhiễm HPV cao rừ rệt là 77,4% [.
Khoa Y tế cụng cộng Trường Đại học Sydney nghiờn cứu trờn 288 đối tượng gỏi mại dõm được quản lý sàng lọc cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục tại Sydney, thủ đụ nước Úc bỏo cỏo kết quả xỏc định tỷ lệ nhiễm HPV là 31,9% .
Như vậy, khi so sỏnh với cỏc kết quả nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV trờn thế giới đó cụng bố cú thể nhận xột tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tăng cao rừ rệt so với tỷ lệ nhiễm HPV trong cộng đồng, và kết quả nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại Hải Phũng tương đồng với kết quả nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm được tập trung quản lý tại cỏc trung tõm y tế ở cỏc chõu lục khỏc trờn thế giới như chõu Phi, chõu Mỹ, chõu Âu và chõu Úc.
Tại chõu Á, theo kết quả phõn tớch tổng hợp từ 11 nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV đường sinh dục trờn 4198 gỏi mại dõm cho thấy tỷ lệ nhiễm HPV ở đối tượng gỏi mại dõm dao động từ 12,8% đến 84,8%, cao gấp 10 lần so với tỷ lệ nhiễm HPV trong cộng đồng [50], [64].
Nghiờn cứu so sỏnh về tỷ lệ nhiễm HPV giữa nhúm đối tượng gỏi mại dõm được thường xuyờn quản lý cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục và nhúm đối tượng gỏi mại dõm khụng được quản lý cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục tại Seoul-Hàn Quốc cho thấy tỷ lệ nhiễm HPV sinh dục ở hai nhúm đối tượng cú sự khỏc biệt rừ rệt là 47,0% và 83,5% [49], [65]. Kết quả này phản ỏnh rừ vai trũ đặc biệt quan trọng của chương trỡnh giỏm sỏt trọng điểm cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục ở cỏc quốc gia.
Tại Việt Nam, theo kết quả nghiờn cứu năm 2003 của nhúm tỏc giả Phạm Thị Hoàng Anh và cộng sự về tỷ lệ nhiễm HPV ở cộng đồng dõn cư nữ
15 đến 69 tuổi tại thành phố Hồ Chớ Minh và tại Hà Nội cho thấy, cú sự khỏc biệt lớn về tỷ lệ nhiễm HPV tại miền Nam và miền Bắc Việt Nam. Tỷ lệ nhiễm HPV ở cộng đồng dõn cư nữ tại thành phố Hồ Chớ Minh là 10,9% cao gấp khoảng 5 lần so với tại Hà Nội (2,0%). Kết quả này giải thớch cho sự chờnh lệch về tỷ lệ UTCTC ở miền Nam cao gấp 4 lần so với ở miền Bắc Việt Nam ].
Để phõn tớch rừ hơn về nguyờn nhõn dẫn tới tỡnh trạng tăng nhanh số lượng bệnh nhõn UTCTC tại Miền Nam Việt Nam, tỏc giả Hernandez thuộc trung tõm nghiờn cứu ung thư Trường Đại học Hawaii (Mỹ) đó phối hợp với viện Pasteur thành phố Hồ Chớ Minh nghiờn cứu về tỷ lệ nhiễm HPV trờn 282 đối tượng gỏi mại dõm tại tỉnh Súc Trăng cho thấy tỷ lệ nhiễm HPV chiếm tới 85,0% và với kết quả nghiờn cứu này, nhúm tỏc giả khẳng định HPV là tỏc nhõn lõy truyền qua đường tỡnh dục phổ biến nhất ở đối tượng gỏi mại dõm tại miền Nam Việt Nam [41]. Tuy nhiờn, đến nay vẫn chưa cú cụng bố chớnh thức nào về tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại miền Bắc Việt Nam.
Với mong muốn cung cấp thụng tin về tỷ lệ nhiễm HPV trờn nhúm đối tượng cú khả năng làm lõy lan nhanh cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục núi chung và lõy truyền HPV núi riờng tại miền Bắc Việt Nam, nhúm nghiờn cứu chỳng tụi đó xỏc định tỷ lệ nhiễm HPV trờn 479 gỏi mại dõm tại Hải Phũng, thành phố cảng lớn nhất khu vực duyờn hải Bắc Bộ là 51,1%. Từ kết quả này, cú thể nhận định tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại miền Bắc Việt Nam mặc dự thấp hơn so với tỷ lệ nhiễm tại miền Nam Việt Nam nhưng đó cú sự tăng nhanh tỡnh trạng nhiễm HPV trong nhúm đối tượng này. Kết quả tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm ở Hải Phũng trong nghiờn cứu tương đồng với tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại một số quốc gia lõn cận như Kyoto - Nhật Bản (52,6%), Manila - Philippin (57,2%); PhnomPenh - Campuchia (41,1%) nhưng cao hơn tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm ở thủ đụ Singapore - Singapore (14,4%); Songkla -
Thỏi Lan ( 22,9%); Bali - Indonesia (38,3%); tỉnh Quảng Tõy, phớa Nam Trung Quốc (38,9%). Tuy nhiờn, tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại Hải Phũng thấp hơn rừ rệt so với tỷ lệ nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm tại Dhaka - Bangladesh (75,8%), Bengal - Ấn Độ (73,3%) và tại tỉnh Hồ Chõu, phớa Nam Trung Quốc (66,7%) [17], [42], [43], [45], [46], [47], [48], [50], [51], [67].
4.1.2. Một số yếu tố liờn quan đến tỷ lệ nhiễm HPV trờn gỏi mại dõm tại Hải PhũngPhũng Phũng
Với sự gia tăng nhanh chúng của số lượng bệnh nhõn nhiễm mới và số trường hợp tử vong bởi cỏc bệnh lý ỏc tớnh liờn quan đến HPV, gỏnh nặng bệnh tật do HPV đang là vấn đề cú ý nghĩa chiến lược đỏng chỳ ý của cụng tỏc chăm súc sức khỏe cộng đồng. Theo thống kờ của Tổ chức Y tế thế giới WHO (World Health Organization), mỗi năm trờn thế giới, tớnh riờng UTCTC đó cú khoảng 493.000 ca mắc mới và khoảng 274.000 trường hợp tử vong do UTCTC. Do đú, việc tỡm hiểu những yếu tố liờn quan tới tỡnh trạng nhiễm HPV, những nguy cơ làm tăng khả năng nhiễm HPV là mối quan tõm lớn của cỏc nhà nghiờn cứu và của đa số phụ nữ trờn thế giới. Kết quả nghiờn cứu phõn tớch, đỏnh giỏ mối liờn quan của những yếu tố làm tăng nguy cơ nhiễm HPV cú ý nghĩa quan trọng giỳp phũng chống lõy nhiễm HPV.
Để phõn tớch mối liờn quan của một số yếu tố tới tỡnh trạng nhiễm HPV trờn đối tượng gỏi mại dõm, chỳng tụi tiến hành thu thập thụng tin từ phiếu phỏng vấn và phõn tớch đơn biến bằng phần mềm SPSS 15.0. Đồng thời, tiến hành phõn tớch hồi quy đa biến để kiểm định mối liờn quan giữa cỏc yếu tố phụ thuộc (cỏc biến phụ thuộc: biến kết quả) với tỡnh trạng nhiễm HPV và mối liờn quan giữa cỏc yếu tố độc lập (biến độc lập: biến tỏc động) với tỡnh trạng nhiễm HPV.
4.1.2.1. Mối liờn quan của lứa tuổi, tỡnh trạng hụn nhõn, trỡnh độ học vấn, tỡnh trạng hỳt thuốc lỏ và sử dụng ma tỳy đến tỷ lệ nhiễm HPV trờn gỏi mại dõm tại Hải Phũng
HPV là tỏc nhõn lõy truyền qua đường tỡnh dục do đú tỷ lệ nhiễm HPV phụ thuộc vào hành vi tỡnh dục của cỏc cỏ thể trong cộng đồng. Sự thay đổi về hành vi tỡnh dục ở cỏc lứa tuổi khỏc nhau sẽ dẫn đến thay đổi về tỷ lệ nhiễm HPV.
Theo kết quả nghiờn cứu tổng hợp dịch tễ học về sự phõn bố tỷ lệ nhiễm HPV theo độ tuổi của nhúm tỏc giả trường Đại học Bắc Carolina nước Anh trờn 70 quốc gia cho thấy, tỷ lệ nhiễm HPV thay đổi theo lứa tuổi, đạt đỉnh cao nhất ở nhúm phụ nữ trẻ dưới 25 tuổi, sau đú giảm dần đến tuổi trung niờn và lại đạt đỉnh cao lần 2 ở độ tuổi 50 ngoại trừ chõu Á (tỷ lệ nhiễm HPV chỉ đạt 1 đỉnh cao nhất ở nhúm phụ nữ trẻ dưới 25 tuổi) [14]. So sỏnh về tỷ lệ nhiễm HPV ở nhúm phụ nữ tuổi trẻ dưới 25 tuổi và nhúm trờn 45 tuổi cho thấy, tỷ lệ nhiễm HPV ở nhúm tuổi trẻ dưới 25 cao gấp 10 lần so với nhúm tuổi trờn 45 [60].
Sự phõn bố theo độ tuổi của HPV cú thể giải thớch do tỷ lệ nhiễm HPV đạt đỉnh cao nhất trong ba năm đầu sau khi hoạt động tỡnh dục, chiếm khoảng 50% tổng số trường hợp nhiễm mới [60]. Đồng thời, sự thay đổi về mụi trường pH õm đạo theo độ tuổi vừa là hậu quả, vừa là nguyờn nhõn liờn quan tới nguy cơ nhiễm cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục và sự nhiễm dai dẳng HPV đường sinh dục. Bỡnh thường, trạng thỏi pH acid ≤ 4,5 của õm đạo luụn được duy trỡ bởi vi khuẩn Lactobaccilus spp. tổng hợp acid lactic từ quỏ trỡnh thoỏi húa glucose dự trữ dưới dạng glycogen trong cỏc tế bào niờm mạc õm đạo theo con đường đường phõn yếm khớ. Ở mụi trường pH acid, õm đạo giảm nguy cơ nhiễm cỏc bệnh lõy truyền qua đường tỡnh dục. Khi đường sinh dục bị viờm nhiễm bởi cỏc tỏc nhõn khỏc sẽ làm giảm quỏ trỡnh tổng hợp acid lactic, giảm vai trũ bảo vệ của Lactobaccilus spp.. Theo kết quả nghiờn cứu của Trung