Phương pháp sinh khối nấm nội sinh

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu nấm nội sinh trong cây nghệ vàng (curcuma longa l ) và các hợp chất thiên nhiên từ nấm nội sinh​ (Trang 27 - 28)

Sau khi đã phân lập đƣợc các chủng nấm sạch ta cần tiến hành nhân nuôi để tạo nguồn giống sinh khối và bảo quản chủng nấm sạch. Có 2 phƣơng pháp sinh khối: sinh khối lỏng và sinh khối rắn.

Phương pháp sinh khối lỏng:

Môi trƣờng lỏng: yeast extract 3g, malt extract 3g, pepton 5g, glucose 20g, nƣớc cất 1l.

Môi trƣờng đƣợc khử trùng ở 121OC trong 30 phút. Sinh khối nấm trong bình tam giác 1l với 300 ml môi trƣờng. Cho vào tủ cấy đã bật đèn UV

chờ môi trƣờng nguội để nuôi sinh khối. Cho đĩa vào tủ cấy đã vô trùng, bóc parafilm, dùng dao cắt đã khử trùng cắt nhỏ đĩa thạch rồi gắp vào môi trƣờng nuôi cấy. Cho môi trƣờng lên máy rung lắc trong khoảng 3-4 tuần tùy từng điều kiện môi trƣờng và đặc điểm sinh trƣởng, triển của chủng nấm sinh khối.

Phương pháp sinh khối rắn:

Môi trƣờng gạo: gạo 100g, nƣớc cất 300ml.

Tiến hành vò qua gạo để sạch bụi bẩn và chấu rồi cho nƣớc sạch và gạo bình tam giác 1l, sau đó khử trùng ở 121 O

C trong 30 phút. Chú ý tùy từng loại gạo ta thể điểu chỉnh lƣợng nƣớc sao cho môi trƣờng đƣợc nấu khử trùng xong hạt gạo không đƣợc nguyên hạt nhƣ cơm, không nhão quá nhƣ cháo. Bình sinh khối không đƣợc bịt kín quá, cần sử dụng nút bông hoặc 2 lớp giấy bạc sạch quấn quá cổ bình tam giác. Cho đĩa giống nấm vào tủ cấy đã vô trùng, bóc parafilm, dùng dao cắt đã khử trùng cắt nhỏ thạch chứa giống nấm đƣợc cắt nhỏ, cấy vào môi trƣờng gạo nuôi cấy. Mẫu nấm đƣợc nuôi từ 4-6 tuần rồi tiến hành ngâm chiết.

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu nấm nội sinh trong cây nghệ vàng (curcuma longa l ) và các hợp chất thiên nhiên từ nấm nội sinh​ (Trang 27 - 28)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(63 trang)