3. Nội dung nghiên cứu
3.3. Nghiên cứu tái sinh chồi từ mô sẹo
Sau khi thu được các khối mô sẹo, cấy chuyển các mô sẹo này sang môi trường tái sinh. Môi trường tái sinh chồi từ mô sẹo là môi trường bổ sung hàm lượng cytokinin/auxin phù hợp cho sự biệt hoá chồi. Trong nghiên cứu này chúng tôi tạo mô sẹo trên môi trường có tỷ lệ NAA/BAP cao, sau đó chuyển sang môi trường bổ sung NAA thấp từ 0,1 đến 0,25 mg/l kết hợp với nồng độ BAP ở nồng độ 0,5 và 1,0 mg/l hoặc kết hợp với kinetin 0,5 và 1,0 mg/l để
nghiên cứu sự tái sinh chồi từ mô sẹo. Các kết qủa thu được trình bày ở bảng 3.5. Kết quả thu được cho thấy, các môi trường nghiên cứu từ TC1 đến TC5 đã có sự ảnh hướng khác biệt rõ rết lên sự tái sinh của mô sẹo. Trên môi trường TC1 và TC2, mô sẹo tiếp tục sinh trưởng và phát triển tốt, mô sẹo lá màu trắng, mềm, nhũn. Khối mô sẹo khá to. Trên môi trườngtrường TC1 (BAP 0,5 mg/l và NAA 0,1 mg/l), tỷ lệ tái sinh chồi đạt 36,4%. Môi trườngTC2 (MS bổ sung BAP 1 mg/l và NAA 0,1 mg/l) cho tỷ lệ tái sinh chồi cao nhất (40,3%),với chất lượng chồi tốt, có màu xanh nhạt. Môi trường TC3(BAP 0,5 mg/l và NAA 0,25 mg/l) cho tỷ tạo chồi thấp nhất, chỉ đạt 27,8 %.
Môi trường TC4 và TC5 bổ sung kinetin 0,5 và 1,0 mg/l kết hợp với NAA 0,1 mg/l đã không có hiệu quả kích thích tạo chồi từ mô sẹo đu đủ. Mô sẹo ban đầu sinh trưởng chậm sau đó vàng dần đi, chưa quan sát thấy hình thành chồi. Như vậy, bổ sung BAP và NAA với tỷ lệ phù hợp dã kích thích mô sẹo tái sinh chồi. Khi hàm lượng auxin cao quá ức chế quá trình tạo mô sẹo, do đó hàm lượng NAA lựa chọn trong nghiên cứu là ≤ 0,25 mg/l.
Bảng 3.5. Ảnh hưởng của tổ hợp BAP và NAA đến khả năng tái sinh chồi của callus đu đủ (Sau 4 tuần nuôi cấy)
Kinetin (mg/l) BAP (mg/l) NAA (mg/l) Đặc điểm sinh trưởng mô sẹo
Tỷ lệ tái sinh chồi (%) 30 ngày Chất lượng chồi ĐC 0 0 0 Không sinh trưởng. 0,0 b Thâm đen TC1 - 0,5 0,1 Khối mô to, mềm, Sinh trưởng tốt.
màu trắng.
36,4a Vàng nhạt
TC2 - 1,0 0,1
Sinh trưởng tốt. Khối mô to, mềm, màu vàng nhạt đến
trắng.
40,3 a
Xanh nhạt
TC3 0,5 0,25 Sinh trưởng khá, khối mô to, màu
27,8ba
vàng nhạt TC4 0,5 - 0,1 Khối mô rắn, màu Sinh trưởng TB
xanh nhạt.
0,0 b Vàng nhạt
TC5 1,0 - 0,1 Khối mô rắn, màu Sinh trưởng TB vàng nhạt.
0,0 b Vàng nhạt
Các giá trị trung bình theo sau bởi các chữ cái khác nhau (a, b, c,…) trong cùng một cột biểu thị sự sai khác có ý nghĩa thống kê theo phép kiểm định Duncan với p < 0,05.
Kết quả nghiên cứu này phù với với nghiên cứu của Đỗ Văn Nam và cộng sự (2013), môi trường cho tỷ lệ callus tái sinh chồi cao nhất (44,44 %) đạt được trên môi trường MS bổ sung BA1 mg/l, NAA 0,1 mg/l [15].
Vậy môi trường phù hợp nhất cho tái sinh chồi đu đủ đực là môi trường MS bổ sung BAP 1mg/l và NAA 0,1 mg/l
A B
Hình 3.4.Chồi tái sinh từ mô sẹo
A và B) Chồi tái sinh từ khối mô sẹo mềm, rời rạc sau 30 ngày và 40 ngày C và D) Chồi tái sinh từ các mô sẹo rắn sau 30 ngày và 40 ngày