Với mục đích tạo chủng biểu hiện gen pel từ B. subtilis cho công nghiệp xử lý vải bông cho nên các chủng B. subtilis đƣợc lựa chọn để sàng lọc enzyme
pel. Để chọn đƣợc các chủng B. subtilis mang gen pel, các vi khuẩn B. subtilis
mua từ bộ sƣu tập chủng giống của VTCC- Viện Vi sinh vật và Công nghệ sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội và Trung tâm Công nghệ sinh học phục vụ đời sống và sản xuất (Biolab) đƣợc sử dụng. Kết quả sàng lọc đƣợc thể hiện trong Bảng 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả sàng lọc các chủng B. subtilis có khả năng phân hủy pectin trên đĩa thạch.
STT Tên chủng
Tên chủng gốc Nguồn gốc Vòng phân pectin thủy
1 VBS1 BIOLAB 1 Đất - 2 VBS2 BIOLAB 2 Đất + 3 VBS3 BIOLAB 3 Đất + 4 VBS4 BIOLAB 4 Đất + 5 VBS5 BIOLAB 5 Đất + 6 VBS6 VTCC-B-380 Đất ++ 7 VBS7 VTCC-B-1010 Đất ++ 8 VBS8 VTCC-B-818 Rễ cây ++ 9 VBS9 VTCC-B-999 Đất ++ 10 VBS10 VTCC-B-1013 Đất ++ 11 VBS11 VTCC-B-485 Đất ++ 12 VBS12 VTCC-B-732 Đất - 13 VBS13 VTCC-B-948 Rong sụn ++ 14 VBS14 VTCC-B-822 Đất ++ 15 VBS15 VTCC-B-275 Đất ++ 16 VBS16 BIOLAB 6 Đất + 17 VBS17 BIOLAB 7 Đất - 18 VBS18 BIOLAB 8 Đất + 19 VBS19 BIOLAB 9 Đất + 20 VBS20 BIOLAB 10 Đất +
Chú thích: (-) Không tạo vòng, (+) tạo vòng yếu, (++) tạo vòng mạnh với cơ chất pectin.
Các chủng vi khuẩn sau khi làm trẻ hóa trên môi trƣờng LB ở 37oC đƣợc cấy chuyển sang môi trƣờng LB thạch đĩa có chứa 0,2% pectin sau đó nuôi tiếp qua đêm để vi khuẩn bộc lộ khả năng sản sinh pectinase. Hoạt tính pectinase đƣợc phát hiện bằng việc nhuộm đĩa thạch với dung dịch 0,5% hecxadecyl trimethyl trimethyl trimethyl ammonium bromide (HTAB). Kết quả thể hiện cho thấy 17 chủng dƣơng tính với pectin trong tổng số 20 chủng vi khuẩn đƣợc sàng lọc (Bảng 3.1 và Hình 3.1). Điều này chứng tỏ hầu hết các chủng trong nghiên cứu đều có khả năng biểu hiện pectinase ra môi trƣờng. Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trƣớc đây về enzyme pectinase trong B. subtilis [31], [30], [44].
Hình 3.1. Hình ảnh một số chủng B. subtilis tạo vòng thủy phân pectin trên đĩa thạch LB 0,2% pectin. Thứ tự các chủng từ 1-10: VBS6 đến VBS15.