6. Cấu trúc của đề tài
3.3.3. So sánh với kít Hemastix của hãng Roche
Hình 5. So sánh với kít Hemastix của hãng Roche
Độ nhạy của kít thử định hướng dấu vết máu Hemastix là 1/2.097.152 cao hơn so với kít thử định hướng của đề tài (kít thử định hướng của đề tài là
THẢO LUẬN
Dựa vào đặc tính của Phenolphthalein và từ những kết quả nghiên cứu trên chúng tôi đã đưa ra quy trình pha chế và sử dụng thuốc thử phenolphthalein cho giám định định hướng dấu vết máu như sau:
1. Quy trình pha chế
- Dung dịch gốc:
Pha dung dịch KOH 25%
Cân 25g KOH, bổ sung dI H2O đến 100ml Bổ sung 10g bột kẽm (Zn) vào dung dịch Bổ sung 2g phenolphthalein
Đun sôi hỗn hợp trên trong thời gian 120 phút (dung dịch chuyển hết sang trạng thái không màu, trong suốt).
Lọc hỗn hợp trên bằng giấy lọc Bổ sung 0.25g bột kẽm
Bảo quản dung dịch trong lọ thủy tinh tối màu ở điều kiện 4oC. - Dung dịch hoạt động
Pha dung dịch gốc với ethanol 95% ở tỉ lệ 1:1 Bảo quản ở nhiệt độ 40C trong điều kiện tối. Cơ chất cho quá trình phản ứng là H2O2 3%
Với máu dấu vết ở trạng thái khô, dùng dung dịch Ethanol 95% để làm ướt dấu vết.
2. Quy trình sử dụng bộ kít thƣơng phẩm
- Dùng bông hay tăm bông thấm ẩm nước cất, lau nhẹ để tách một phần nhỏ dấu vết cần thử định hướng.
- Nhỏ một giọt dung dịch Alcohol (dung dịch 1) vào dấu vết và đợi khoảng 40 giây, nhỏ tiếp một giọt dung dịch đổi màu (dung dịch 2), sau đó nhỏ một giọt H2O2 3% (dung dịch 3) vào dấu vết và đọc kết quả.
- Đánh giá kết quả:
+ Dương tính: cho kết quả màu hồng + Âm tính: không đổi màu
Phản ứng chỉ đọc kết quả trong vòng 1 phút.
Bảng 3.14. Kết quả tổng hợp so sánh độ nhạy của phản ứng đối với các kít thử định hướng thương mại
STT Độ pha Độ pha loãng Dương tính phenol Dương tính benzidine Dương tính metech Dương tính Hemastix 1 1/2 + + + + 2 1/4 + + + + 3 1/8 + + + + 4 1/16 + + + + 5 1/32 + + + + 6 1/64 + + + + 7 1/128 + + + + 8 1/256 + + + + 9 1/512 + + + + 10 1/1024 + + + + 11 1/2048 + + + + 12 1/4096 + + + + 13 1/8192 + + + + 14 1/16384 + + + + 15 1/32768 + + + + 16 1/65536 + - + + 17 1/131072 + - + + 18 1/262144 - - - + 19 1/524288 - - - + 20 1/1048576 - - - + 21 1/2097152 - - - + 22 1/4194304 - - - -
3. Đánh giá triển khai ở các địa phương
Từ kết quả nghiên cứu đạt được, chúng tôi tiến hành thử nghiệm dung dịch phenolphthalein dưới dạng bộ kít và gửi về một số địa phương để kiểm nghiệm, đánh giá chất lượng, có 07 đơn vị gửi đánh giá về một số tiêu chí sau:
+ Chất lượng của bộ kít + Thao tác sử dụng + Độ nhạy
+ Khả năng triển khai trong giám định và khám nghiệm hiện trường. Các địa phương đã gửi kết quả nhận xét:
- Phòng KTHS Công an TP Hải Phòng - Phòng KTHS Công an tỉnh Vĩnh Phúc - Phòng KTHS Công an tỉnh Bắc Giang - Phòng KTHS Công an tỉnh Thanh Hóa - Phòng KTHS Công an Thừa Thiên Huế - Phòng KTHS Công an TP Hồ Chí Minh - Phân Viện KHHS tại TP Hồ Chí Minh
Bảng 3.15. Tổng hợp kết quả nhận xét của các địa phương. Đánh giá
Tiêu chí Rất tốt Tốt Đạt Không đạt
Chất lượng của bộ kít 4/7 2/7 1/7 -
Thao tác sử dụng - 6/7 - 1/7
Độ nhạy 3/7 4/7 - -
Khả năng triển khai trong khám nghiệm hiện trường
Hiện tại có trên 30 đơn vị là các phòng Kỹ thuật hình sự Công an các địa phương đề nghị đưa dung dịch thuốc thử phenolphthalein vào sản xuất thành các bộ kít để cung cấp cho các địa phương nhằm thay thế thuốc thử dấu vết máu bằng dung dịch Benzidine.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận
Đã xác định được hóa chất chuyển đổi phenolphthalein từ trạng thái oxy hóa sang dạng khử là kim loại kẽm (Zn), quá trình chuyển đổi diễn ra ở nhiệt độ sôi của dung dịch.
Đã tối ưu và đưa ra được quy trình chuẩn dùng để pha chế thuốc thử định hướng và xây dựng các bước hướng dẫn sử dụng thuốc thử định hướng dấu vết máu.
Đã xác định được độ nhạy của phản ứng đối với dung dịch máu pha loãng tới 1/65.536 lần vẫn cho kết quả dương tính đạt tới tỉ lệ 98%. Với máu sau 2 tháng độ nhạy giảm xuống chỉ còn khả năng dương tính với tỉ lệ 84% và sau 4 tháng, 6 tháng tỉ lệ này lần lượt là 52% và 42%.
Khả năng dương tính giả của thuốc thử: chỉ dương tính với nhóm nhựa thuộc họ cải trong những nhóm chất tiến hành thử nghiệm.
Độ nhạy của thuốc thử nhạy hơn so với thuốc thử bằng dung dịch benzidine (dung dịch benzidine có độ nhạy với máu toàn phần pha loãng 1/32.768).
Thuốc thử định hướng dấu vết máu sử dụng phenolphthalein đã đáp ứng đầy đủ những tiêu chí trong giám định dấu vết máu, như:
- Có tính đặc hiệu cao với dấu vết máu.
- Có độ nhạy đảm bảo các tiêu chuẩn của giám định sinh học pháp lý. - Được sử dụng rộng rãi trên thế giới.
- Có độc tính thấp.
- Dễ tìm kiếm sử dụng và bảo quản.
2. Kiến nghị:
Sau khi thực hiện đề tài, chúng tôi có một số kiến nghị như sau:
Phương pháp giám định định hướng bằng kít phenolphthalein có thể thay thế phương pháp giám định định hướng dấu vết máu sử dụng benzidine vì những lợi ích về môi trường, sức khỏe cán bộ chiến sỹ và đặc biệt là gia tăng độ nhạy, độ tiện dụng của phương pháp tránh sai sót trong quá trình khám nghiệm hiện trường và giám định dấu vết máu.
Tiếp tục nghiên cứu để tạo ra bộ kít hoàn chỉnh và tiến tới nghiên cứu để tạo ra bộ kít ở dạng khô, tương tự như kít Hemastic trên thị trường phục vụ tốt hơn cho công tác giám định và khám nghiệm hiện trường dấu vết máu.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt
1. PGS.TS. Ngô Tiến Quý, Hà Quốc Khanh, TS. Nguyễn Văn Hà, và cộng sự, Giám định sinh học pháp lý. Giáo trình. Viện khoa ho ̣c hình sự, 2005. 2. Hà Quốc Khanh, TS. Nguyễn Văn Hà (2007), Giám định ADN, Giáo
trình, Viê ̣n khoa ho ̣c hình sự.
3. PGS.TS. Ngô Tiến Quý (2008), Bảo vệ và khám nghiệm hiện trường, NXB Công an Nhân dân.
4. Ths. Phạm Xuân Thủy, CN. Hà Quốc Khanh (2010), Dấu vết sinh vật và
pháp y hình sự, Giáo trình, Học viện Cảnh sát Nhân dân.
5. PGS.TS. Ngô Tiến Quý (2013), Phát hiện, thu, bảo quản, nghiên cứu và
giám định dấu vết sinh học, NXB Công an Nhân dân.
6. Bạch Quốc Tuyên và cộng sự (1974), Huyết học, tập 1, NXB Y học, Hà Nội. 7. Vũ Triệu An, Lê Đức Cư, Văn Đình Hoa, Nguyễn Ngọc Lanh, Đỗ Trung
Phấn, Phạm Hoàng Phiệt (1982), Những kỹ thuật cơ bản trong miễn dịch học, tập 1 và 2, NXB Y học, Hà Nội.
Tiếng anh
8. Budowle B, Leggitt JL, Defenbaugh DA, Keys KM, Malkiewicz SF. The presumptive reagent fluorescein for detection of dilute bloodstains and
subsequent STR typing of recovered DNA. J Forensic Sci 2000;45:1090-2.
9. Butler J.M (2001), Forensic DNA: biology adn technology behind STR
marker. Academic Press, London.
10.Butler J.M., Ruitberg C.M. and Reeder D.J (1997), Proceedings of the
Eighth Internationnal Symposium on Human Identification. Madison WI:
Promega corporation, pp73-88.
11.Culliford, B.J.and Nickolls, L.C., The Benzidine Test, Journal of Forensic Sciences. JFSCA, vol.9, No.1, Jan.1964, pp.175-191.
12.D.D. Garner, Ph.D.;K.M.Cano, M.S.;R.S.Peimer, M.S.;and T.E. Yeshion, M.S. An Evaluation of Tetramethylbenzidine as a Presumptive Test for Blood.
13.Cox, M, A study of the sensitivity and specificity of tests for blood Stock Four, Forensic Science Journal, JFSCA, Vol. 36, No. 5, September 1991, pp.1503-1511.
14. Justin lautz, B.S. Samantha webb, B.S.A comparision a study on the new formula of bluster latent bloodstain and its effects on ADN tying/ Amplyfication.
15.Occupational Safety and Health Administration, Regulation H002. Washington, D.C.,29 jan.1974.
16.Shanan S.Tobe,M.Sc.; Nigel Watson, Ph.D.; and Niamh Nic Dae’id, Ph.D.Evaluation of six Presumptive Tests for Blood, Their Specificity, Sensitivity, and Effect on High Molecular – Weight ADN.
17.Chelex® DNA Extraction, Method N0 6A. Victoria forensic Science – 1998.