kính hiển vi, độ phóng đại 1000 lần
Hình 4.2.Hình thái khuẩn lạc
4.3. TỔNG SỐ VI KHUẨN E.COLI CÓ TRONG MẪU PHÂN VỊT BIỂN 15 – ĐẠI XUYÊN NUÔI TẠI HAI MÔI TRƯỜNG NƯỚC KHÁC NHAU – ĐẠI XUYÊN NUÔI TẠI HAI MÔI TRƯỜNG NƯỚC KHÁC NHAU
Để đánh giá ảnh hưởng của môi trường nước nói chung và nồng độ muối nói riêng đến mức độ nhiễm E.coli ở vịt Biển 15 – Đại Xuyên, chúng ta tiến hành xác định tổng số vi khuẩn E.coli của 12 mẫu phân trong đó có 6 mẫu phân được lấy từ môi trường nước ngọt và 6 mẫu phân được lấy từ môi trường nước mặn. Kết quả được trình bày ở bảng 4.3
Bảng 4.3. Kết quả xác định tổng số vi khuẩn E.coli trong phân vịt Biển 15 – Đại Xuyên
Tổng số vi khuẩn E.coli/g phân
TT Mẫu Mẫu phân vịt nước ngọt TT Mẫu Mẫu phân vịt nước mặn
1 2 x 108 1 21 x 108 2 7 x 108 2 29 x 108 3 5 x 108 3 31 x 108 4 2,5 x 108 4 35 x 108 5 3,8 x 108 5 40 x 108 6 2,4 x 108 6 23 x 108 Trung bình 3,78 x 108 Trung bình 29,83 x 108
Bảng 4.3 cho ta thấy trung bình tổng số vi khuẩn E.coli xác định được trên 1g phân vịt Biển nuôi trên môi trường nước mặn (29,83 x 108) cao hơn rất nhiều so với trên 1g phân vịt Biển nuôi trên môi trường nước ngọt (3,78 x 108). Kết quả này trái với suy đoán ban đầu, khi đưa vịt ra môi trường nước mặn nuôi thì tổng số vi khuẩn E.coli/g phân vịt sẽ giảm xuống.
4.4. KHẢ NĂNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA CÁC CHỦNG E. COLI
PHÂN LẬP ĐƯỢC
Khi vịt mắc bệnh, việc điều trị là khó khăn, chúng ta không thể tách từng con để điều trị mà phải điều trị toàn đàn. Vịt nuôi tập trung, mật độ cao thì khả năng phát bệnh trên toàn đàn là rất nhanh cả về tình trạng và tính chất bệnh. Lựa
chọn các loại kháng sinh thích hợp, giúp cho công tác điều trị bệnh trên vịt hiệu quả cao là cần thiết và quan trọng, mặt khác hạn chế tình trạng sử dụng kháng sinh không hợp lý dẫn đến hiện tượng kháng thuốc. Xác định mức độ kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập tại thực địa được chú trọng và để làm cơ sở cho lựa chọn thuốc điều trị phù hợp. Trong nghiên cứu này chúng tôi tiến hành phân lập 30 chủng E.coli từ phân vịt nước mặn và 30 chủng E.coli từ phân vịt nuôi tại môi trường nước ngọt để kiểm tra mẫn cảm kháng sinh. Các kháng sinh đang được dùng rộng rãi trong chăn nuôi được sử dụng trong nghiên cứu này (14 loại kháng sinh). Kết quả đánh giá tính mẫn cảm kháng sinh được trình bày ở bảng 4.4.
Kiểm tra khác sinh đồ cho kết quả:
Vi khuẩn E.coli mẫn cảm với 14 loại kháng sinh là thấp, hầu hết các chủng E.coli kháng các loại kháng sinh từ 0% – 100%. Với 30 chủng E.coli
kiểm tra trên môi trường nước ngọt chúng ta có thể thấy tỷ lệ kháng kháng sinh quá cao với kết quả kháng 100% với 9/14 loại kháng sinh được kiểm tra . Tiếp theo kháng Trimethoprim + Sulfamethoxazone 90%, Colistin 83,3%, Gentamycin là 56,7%, Tylosin 46,7%. Ngoại trừ Amoxicillin – kháng sinh thuốc nhóm β –lactam cho tỷ lệ mẫn cảm cao 100%. Đây là một trong những điều cực kì đáng lo ngại, cho chúng ta thấy tỷ lệ kháng kháng sinh ở các loại vi khuẩn đang gia tăng rất cao.
Hình 4. 3.Khả năng mẫn cảm và kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli phân lập từ vịt Biển 15 – Đại Xuyên
Bảng 4.4. Kết quả kháng sinh đồ
Kháng sinh Ecoli từ phân vịt nước mặn Ecoli từ phân vịt nước ngọt Số chủng
kiểm tra Số chủng kháng Tỷ lệ (%) Số chủng kiểm tra Số chủng kháng Tỷ lệ (%) Amoxicillin/ Clavulanic acid 30 0 0 30 0 0 Ampicillin 30 30 100 30 30 100 Flumequin 30 30 100 30 30 100 Doxyciclin 30 16 53,3 30 30 100 Colistin 30 15 50 30 25 83,3 Ceftiofur 30 25 83,3 30 30 100 Gentamycin 30 10 33,3 30 17 56,7 Norfloxacin 30 30 100 30 30 100 Oxytetracyclin 30 30 100 30 30 100 Tylosin 30 14 46,7 30 14 46,7 Tilmicosin 30 24 80 30 30 100 Tetracyclin 30 22 73,3 30 30 100 Lincomycin + Spectinomcin 30 19 63,3 30 30 100 Sulphamethoxazo n + trimethoprim 30 21 70 30 27 90
Với 30 chủng Ecoli kiểm tra tại môi trường nước mặn ta nhận thấy có 4/14 loại kháng sinh là Ampicillin, Flumequin, Norfloxacin , Oxytetracyclin đã bị kháng tới 100%. Bên cạnh đó so với Ecoli phân lập tại môi trường nước ngọt thì mức độ kháng kháng sinh trên môi trường nước mặn thấp hơn rất nhiều.Tỷ lệ mẫn cảm với một số dòng kháng sinh như Trimethoprim + Sulfamethoxazone 70%, Colistin 50%, Gentamycin là 33,3%, Tylosin 46,7% thể hiện rất rõ điều đó.
Trong 14 loại kháng sinh được kiểm tra thì vi khuẩn E.coli mẫn cảm mạnh với Amoxicillin/ Clavulanic acid (tỷ lệ kháng 0%) .Có lẽ phương thức chăn nuôi tại môi trường nước mặn ( thả tự do cho vịt tìm mồi trên biển, hạn chế tối đa việc dùng cám công nghiệp) kết hợp với việc hạn chế sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi đã có tác động lớn tới vấn đề kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli.
Theo Đặng Xuân Bình và Đỗ Văn Trung (2008), các chủng E.coli phân lập từ mẫu bệnh phẩm lợn con phân trắng cho kết quả kháng sinh đồ mẫn cảm với đa số kháng sinh, tỷ lệ mẫn cảm từ 50%-83,3%. Mẫn cảm nhất là đối với Ceftazidime và Norfloxacin (83,3%), tiếp đến là Gentamicin, Neomycin, Spectinomycin, Sulfomethoxazol (66%). Mức độ kháng thuốc của các chủng
E.coli từ 16,6%-33,33%.
Kiểm tra tính mẫn cảm của 58 chủng E.coli phân lập từ ngan bệnh với 13 loại kháng sinh cho thấy: tỷ lệ mẫn cảm là rất thấp, duy nhất Ceftriaxon có độ nhạy cao 100%. Song đây là kháng sinh thế hệ mới thuộc nhóm Cephalosporin, chỉ điều trị trong những trường hợp nhiễm khuẩn nặng, tránh lạm dụng kháng sinh để có kết quả điều trị như mong muốn, các kháng sinh còn lại có độ nhạy từ 48,2%-0%. Các chủng E.coli đã kháng hoàn toàn với hai loại kháng sinh là Tetracyclin và Ceftriaxon (100%), tiếp đến là Streptomycin và Apramycin (96,6%), Sulfamethaxazol/ Trimethoprim (82,8%). Ngoại trừ Ceftriaxon ra thì mức độ kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli là rất cao từ 56,9-100% (Nguyễn Thị Liên Hương và cs., 2010).
Theo Võ Trà An và cs. (2010), đánh giá mức độ mẫn cảm của 11 loại kháng sinh đối với 100 vi khuẩn E.coli phân lập từ phân của heo và bò như sau: kháng cao nhất là Amoxicillin/Clavulanic acid 73%, tiếp đến là Norfloxacin (66%), Gentamicin (40%), Chloramphenicol (34%), Kanamycin (33%), Trimethoprim/Sulfamethoxazol (29%), Cephalexin (25%), Ampicillin (21%), Tetracyclin (20%), Colistin (7%).
Theo Lê Văn Đông (2010) khảo sát độ nhạy của 12 loại kháng sinh thông dụng đối với vi khuẩn E.coli gây bệnh trên vịt chạy đồng tại tỉnh Trà Vinh cho kết quả: Vi khuẩn E.coli mẫn cảm mạnh với Amikacin (97,92%), tiếp đến là Colistin (91,67%), Fosfomycin (85,42%) và Ampi+Sulbactam (83,33%). Vi khuẩn E.coli kháng 11/12 loại kháng sinh thông dụng, tỷ lệ kháng từ 2,08- 68,75%. Sự kháng kháng sinh trong nghiên cứu này khác nghiên cứu của chúng
tôi, tỷ lệ kháng thấp hơn. Điều này có thể liên quan đến sự xuất hiện của các vi khuẩn kháng thuốc và tần xuất dùng kháng sinh.
Qua các nghiên cứu trong nước cho thấy vi khuẩn E.coli phân lập từ các động vật khác nhau từ các địa phương khác nhau thì mức độ kháng kháng sinh tăng dần theo năm và tỷ lệ kháng kháng sinh ngày càng tăng. Vi khuẩn E.coli
ngày càng kháng nhiều loại kháng sinh hơn. Cơ chế kháng kháng sinh của vi khuẩn theo cơ chế truyền chiều dọc, truyền chiều ngang, làm tăng các gen kháng thuốc. Đây cũng là mối lo ngại cho công tác điều trị lâm sàng. Kết quả cũng là hồi chuông cảnh báo cho người chăn nuôi khi sử dụng kháng sinh tràn lan.
Theo Zinnah et al. (2008) có 90 % các chủng E.coli đã kháng với 3 kháng sinh thuốc 3 nhóm khác nhau: Ampicillin (nhóm β-lactam), Tetracycline (nhóm Tetracyclines) và Erythromycin ( nhóm Macrolides).
Theo Avishek et al. (2012) các chủng E.coli phân lập từ vịt ở Nepal và Bangladesh rất mẫn cảm với Cloramphenicol, Amoxycillin và Cephalexin (100%). Riêng các chủng E.coli có nguồn gốc từ Nepal còn nhạy với kháng sinh Cotrimoxazole (100%). Tỷ lệ kháng kháng sinh của các chủng E.coli thấp trung bình là 50% kháng sinh kiểm tra.
Theo Adzitey et al. (2013), kiểm tra kháng sinh đồ của 55 chủng E.coli
phân lập từ vịt ở Penang và Malaysia cho kết quả: 100% các chủng đã kháng Vancomycin, 92,7% các chủng kháng Tetracyclin, tiếp đến là Ampicillin (72,7%), Streptomycin và Sulfamethoxazole – Trimethoprim (67,3%). Vi khuẩn
E.coli nhạy cảm nhất với Nitrofurantoin (61,8%), tiếp đến là Ofloxacin và Gentamicin (52,7%).
Các nghiên cứu của nước ngoài cũng cho thấy tỷ lệ kháng thuốc của E.coli
phân lập từ vịt là cao, và số lượng kháng sinh bị kháng ngày càng tăng. Tuy nhiên mức độ kháng các loại thuốc ở mỗi quốc gia là khác nhau, nó phản ánh thực tế tình hình sử dụng kháng sinh ở mỗi nước, sự kháng thuốc của vi khuẩn và khả năng truyền gene kháng thuốc giữa các loài vi khuẩn với nhau.
Nghiên cứu về tính kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli, các tác giả đều thống nhất: sự quen thuốc của vi khuẩn E.coli có chiều hướng tăng theo thời gian sử dụng. Có nhiều nguyên nhân dẫn đến hiện tượng kháng thuốc mà nguyên nhân đầu tiên là do cách sử dụng thuốc không đúng kỹ thuật của người chăn nuôi. Nguyên nhân sâu xa của vấn đề này là gene sản sinh yếu tố kháng thuốc nằm
trong Plasmid R (Resistance). Plasmid này có thể di truyền dọc (chuyền từ bố, mẹ sang con) và di truyền ngang cho tất cả các quần thể vi khuẩn thích hợp, trong đó phương thức truyền ngang tiếp hợp là quan trọng nhất. Cần phải có một chiến lược cụ thể để hướng dẫn sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi và thú y một cách hợp lý, nhằm ngăn chặn và giảm bớt tình trạng kháng thuốc tràn lan. Khi hiện tượng kháng thuốc xảy ra trên diện rộng thì hậu quả để lại rất nghiêm trọng, gây thiệt hại lớn đến lợi ích kinh tế, chất lượng con giống, số lượng và quy mô đàn giống bị đe dọa nghiêm trọng và hơn hết là ảnh hưởng trực tiếp tới con người.
Trong quy trình nuôi vịt nước tại Trung tâm nghiên cứu vịt Đại Xuyên, cho đến nay vẫn còn bổ sung kháng sinh cho vịt trong những giai đoạn có nguy cơ cao nhằm phòng bệnh cho đàn. Hơn nữa, trong nhiều thời điểm, vịt mắc các bệnh khác nhau trong đó có những bệnh phải điều trị bằng kháng sinh. Đây có thể là một trong những nguyên nhân xuất hiện E coli có khă năng kháng thuốc.
Tại trang trại Đoàn Văn Vươn, chủ trang trại xây dựng quy trình nuôi vịt theo phương thức bán hoang dã, vịt tự do kiếm ăn trong môi trường nước có độ mặn 2,8% . Một số loại thức ăn được bổ sung cho vịt nhưng bổ sung kháng sinh được hạn chế. Điều này dẫn đến tỷ lệ phân lập đối với vi khuẩn E. coli từ các mẫu phân của nhóm vịt này cao hơn của vịt nuôi trong môi trường nước ngọt tại trung tâm nghiên cứu vịt Đại Xuyên. Tuy nhiên, tỷ lệ các chủng E. coli từ vịt “nước mặn” mẫn cảm với kháng sinh cao hơn đồng nghĩa với khả năng kháng kháng sinh thấp hơn. Đây là một ví dụ điển hình về mối quan hệ giữa các yếu tố môi trường nuôi – quy trình nuôi - vi khuẩn gây bệnh – đặc điểm sinh học của vi khuẩn gây bệnh. Kết quả này gợi ý cho những nghiên cứu tiếp theo về mối quan hệ lý thú này.
4.5. TRIỆU CHỨNG CỦA VỊT BIỂN 15 – ĐẠI XUYÊN NGHI MẮC
COLLIBACILLOSIS
Đã theo dõi các triệu chứng của vịt Biển 15 – Đại Xuyên nghi mắc
Colibacillosis. Cũng như các bệnh truyền nhiễm khác, khi vịt mắc Colibacillosis
thường có các biểu hiện chung như: vịt kém ăn hoặc bỏ ăn, đứng một góc, xù lông, xã cánh, rụt cổ, ít vận động và thường nhắm mắt, có thể có phân bết đít…Vi khuẩn E.coli có tính chất gây bệnh đặc trưng: sau khi vi khuẩn xâm nhập vào máu, vi khuẩn E.coli theo dòng máu, đi đến các cơ quan phủ tạng như ruột, túi khí, gan…cư trú và gây biến đổi bệnh lý tại đó, do đó các thể bệnh là rất đa dạng và các triệu chứng biểu hiện khác nhau. Kết quả trình bày ở bảng 4.5.
Bảng 4.5. Một số triệu chứng và tỷ lệ vịt Biển 15 – Đại Xuyên nghi mắc Colibacillosis (n=500) Triệu chứng Bỏ ăn, ủ rũ Phân xanh, nhầy, lẫn máu Bỏ ăn, ủ rũ Mất thăng bằng Bỏ ăn, ủ rũ Vịt chết do bệnh Số biểu hiện (con) 273 305 273 207 273 148 Tỷ lệ biểu hiện (%) 54,6 61,0 54,6 41,4 54,6 29,6
Khi vịt mắc bệnh Colibacillosis thì triệu chứng điển hình nhất là tiêu chảy phân xanh, nhầy, có máu (dạng máu màu nâu hoặc màu đỏ) chiếm tỷ lệ cao nhất (61%). Nguyên nhân do vi khuẩn E.coli gây viêm niêm mạc ruột làm cản trở quá trình tiêu hóa và hấp thu thức ăn, thức ăn không được tiêu hóa sẽ lên men (hiện tượng vịt đầy hơi) và là nguồn dinh dưỡng cho vi sinh vật có hại phát triển, đồng thời độc tố của vi khuẩn E.coli cũng góp phần gây rối loạn tiêu hóa, viêm niêm mạc ruột, đôi khi gây xuất huyết, có nhiều trường hợp gây viêm ruột hoại tử, biểu hiện là phân xanh, nhầy có lẫn máu.
Khó thở cũng là triệu chứng điển hình. Vi khuẩn E.coli từ máu đến túi khí, khi đến túi khí nó gây biến đổi bệnh lý, túi khí ban đầu bị viêm dầy lên, sau đó được phủ fibrin, gây viêm dính túi khí và các cơ quan phủ tạng, viêm dính có màng fibrin phủ bề mặt gan, viêm dính bọc tim, ảnh hưởng nghiêm trọng đến quá trình hô hấp, biểu hiện là vịt há mỏ để thở, vảy mỏ, có tiếng thở khò khè (hen, khẹc).
Các vịt mắc bệnh phần lớn đều có triệu chứng bỏ ăn, ủ rũ, rụt đầu, xã cánh, (chiếm 54,6%). Vịt rất lười vận động, thường đứng hoặc nằm riêng một góc. Vịt bỏ ăn cùng với triệu chứng phân xanh, nhầy, lẫn máu dẫn đến vịt chết rất nhanh, tỷ lệ chết có thể lên đến 20%. Ngoài ra, một số vịt mắc bệnh cấp tính, không biểu hiện rõ triệu chứng, vẫn ăn uống bình thường nhưng vịt lại chết rất nhanh. Những vịt có các triệu chứng bỏ ăn, phân xanh, nhầy, lẫn máu và khó thở thường kèm theo triệu chứng mất thăng bằng, vịt bị đói, vi khuẩn tấn công dẫn đến hiện tượng run chân, có khi vi khuẩn gây độc thần kinh nên vịt mất thăng bằng, tỷ lệ mất thăng bằng chiếm 41,4%.
Ngoài ra, vịt còn biểu hiện các triệu chứng khác (viêm mắt, ỉa chảy…). E. coli gây viêm giác mạc mắt nên vịt có hiện tượng chảy nước mắt, nhiều con mù
mắt. Điều quan trọng là khi vịt bị đầy đủ các triệu chứng như: bỏ ăn, khó thở, phân xanh, nhầy lẫn máu và mất thăng bằng thì tỷ lệ chết rất cao, vịt chết nhanh, tỷ lệ chết lên đến 29,6% gây thiệt hại nghiêm trọng cho chăn nuôi, ảnh hưởng đến chất lượng giống, nhất là đàn giống ông bà.
4.6.BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA VỊT BIỂN 15 – ĐẠI XUYÊN NGHI MẮC
COLIBACILLOSIS
Chúng tôi tiến hành mổ khám 100 vịt có triệu chứng điển hình bệnh, bị bệnh nặng, vừa mới chết hoặc gần chết ở các lần mổ khác nhau. Kết quả mổ khám bệnh tích được trình bày ở bảng 4.6.
Vịt bị bệnh thường có 6 loại bệnh tích chính: viêm ruột, gan sưng, viêm túi khí, tích nước xoang bụng, viêm thận, viêm dính màng tim.
Viêm túi khí ở vịt có thể là nguyên phát cũng có thể là kế phát sau CRD, mổ khám thấy bệnh tích điển hình của viêm túi khí là: túi khí đục, thành dầy, có phủ fibrin hoặc viêm dính, bệnh thường xảy ra ở 2 túi khí phía trước và túi khí mạng sườn.
Khi vịt bị viêm túi khí thì thường viêm sang các cơ quan phủ tạng như: lan sang phổi, tim, gan, khi bệnh nặng toàn bộ túi khí, màng tim và màng gan dầy lên, có thể có các lớp fibrin dầy bao phủ toàn bộ các phủ tạng.
Tích nước xoang bụng là hiện tượng xoang bụng chứa nhiều dịch, ban đầu của quá trình bệnh dịch có màu trong, càng lâu thì dịch càng đục, thường kèm theo hiện tượng fibrin viêm dính các cơ quan phủ tạng. Gan sưng, trên bề mặt gan có các điểm tụ huyết, ban đầu màu đỏ, sau đó chuyển sang màu thâm. Ruột